אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 3:29 דק׳ • July 8th, 2025
כדי לקבוע את גודל שברי ה-DNA באמצעות אלקטרופורזה נימית, התחל בלקיחת לוחית בדיקה מרובת בארות. כל באר מכילה אמפליקונים PCR בעלי תווית פלואורסצנטית בגודל שונה - אוליגונוקלאוטידים דו-גדיליים של DNA המתקבלים לאחר מחזור PCR.
הוסף לבאר כמה מקטעי DNA דו-גדיליים בגודל שונה, המשמשים כתקן גודל. כל אחת ממולקולות ה-DNA הללו נושאת תג פלואורסצנטי לזיהוי קל.
משלימים את הבאר עם פורממיד, דנטורנט חזק, ומחממים בטמפרטורה גבוהה. שלב זה מנטרל את ה-DNA, ויוצר שברים חד-גדיליים שיכולים לנדוד בקלות דרך נקבוביות הג'ל.
הנח את הצלחת ביחידת מנתח שברים המכילה ג'ל פולימרי מוזרק מראש בתוך מערכת הנימים שלה.
הפעל מתח גבוה כדי להכניס באופן אלקטרוקינטי את ה- DNA מהבאר לנימים בקוטר דק בקתודה - הקצה השלילי. מולקולות ה-DNA הטעונות שלילית נודדות לעבר האנודה הטעונה חיובית. גדילי ה-DNA הקצרים יותר מתמודדים עם פחות כוח חיכוך ונעים מהר יותר דרך הג'ל מאשר גדילי ה-DNA הארוכים יותר.
במהלך הגירה חשמלית, הדנ"א חוצה את נתיב קרן הלייזר, מה שגורם לצבע להאיר. אותות הפליטה מהצבע נלכדים על ידי גלאי ומתורגמים מאוחר יותר לאלקטרופרוגרמה - גרף המייצג כל DNA פלואורסצנטי כשיא אינדיבידואלי בצבע שונה.
השווה את שיא שבר ה-DNA הלא ידוע עם פסגות הייחוס כדי לנתח את גודלו.
לאחר אישור מגברי PCR, השתמש ברצועות או לוחות PCR חדשים, כדי לדלל מוצרי PCR 1 עד
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים