אלקטרופורזה ג'ל אלקליין חד-תאי: טכניקה רגישה להערכה כמותית של נזק לדנ"א בתאי סרטן בודדים לאחר כימותרפיה

תרופות כימותרפיות גורמות לשבירת DNA חד-גדילית וכפולה בתאים סרטניים, וגורמות לנזק ל-DNA ולמוות של תאים.

כדי לכמת את הנזק ל-DNA, ערבבו את תאי הסרטן שטופלו בכימותרפיה עם אגרוז מותך נמס נמוך. שפכו את התערובת הזו על שקופיות זכוכית מצופות מראש של אגרוז. אפשר לאגרוז המותך להתמצק, להטמיע את התאים בתוך מטריצת הג'ל הנקבובית.

טפל במאגר ליזה המכיל ריכוזים גבוהים של חומרי ניקוי ומלחים. חומרי ניקוי מסיסים ממברנות תאיות וגרעיניות. יתר על כן, מלח גבוה מסיר את חלבוני ההיסטון מה-DNA, ומשאיר DNA מפותל מחובר למטריצה הגרעינית.

דגירה במאגר אלקטרופורזה אלקליין. הסביבה האלקליין גורמת לסלילי העל של ה-DNA להירגע, וחושפת שברי DNA חד-גדיליים ודו-גדיליים.

הנח את השקופיות במגש ג'ל המכיל מאגר אלקטרופורזה. התחל אלקטרופורזה.

בהיותו טעון שלילי, ה- DNA נמשך לעבר האנודה החיובית. מקטעי ה-DNA הפגועים נודדים החוצה מהגרעין ועוברים דרך מטריצת הג'ל הנקבובית, כאשר מקטעים ארוכים יותר נעים לאט יותר משברים קצרים יותר. נהפוך הוא, DNA לא פגום אינו נודד בקלות, ונשאר בתוך הגרעין.

לאחר אלקטרופורזה, צבעו את התאים בתמיסת צבע של חומצת גרעין פלואורסצנטית. מולקולות הצבע נקשרות ל-DNA.

תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי, תאים בודדים המכילים DNA פגום מציגים מבנה שביט פלואורסצנטי. 'ראש' השביט מייצג DNA לא פגום, בעוד שה'זנב' מורכב מקטעי DNA פגומים.

ה