JoVE Encyclopedia of Experiments
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 4:21 דק' • July 8th, 2025
אלקטרופורזה מיקרופלואידית היא טכניקה להפרדת שברי DNA בגדלים שונים בתוך מיקרו-נימים.
כדי להתחיל, קח שבב מיקרופלואידי מרובה בארות עם בארות ייעודיות לתערובת של פולימר מבוסס ג'ל וצבע פלואורסצנטי, דגימות DNA וסולם DNA ידוע במשקל מולקולרי. בארות אלה מחוברות זו לזו באמצעות רשת של מיקרו-ערוצים.
יש להוציא תערובת צבע ג'ל לבארות שהוקצו. הרכיבו את השבב על תחנת תחול המצוידת מראש במזרק ריק. לחץ כלפי מטה על בוכנת המזרק, הפעל לחץ כדי לאלץ את תערובת צבע הג'ל לתוך מיקרו-תעלת ההפרדה.
הסר את השבב והכניס רכיבים אחרים לבארות שלהם. הוסף סמן - תקן פנימי המכייל את גודל הדגימה - לבארות המכילות את הסולם והדגימות.
הכנס את השבב למנתח שברים כדי להפעיל את השבב. ברגע שנכנס פנימה, המתח המופעל מייצר כוחות אלקטרופורטיים, ומניע את הדגימה מהבאר למיקרו-ערוץ טעינת הדגימה משם היא מגיעה לצומת בין תעלה זו לתעלת ההפרדה. הזרם החשמלי עוזר לדגימה להיכנס למיקרו-ערוץ ההפרדה.
מולקולות הצבע הפלואורסצנטיות משלבות מקטעי DNA טעונים שלילית הנעים לעבר האנודה במהירויות אלקטרופורטיות שונות ביחס לגודלם המולקולרי - שברים קטנים יותר נודדים מהר יותר מגדולים יותר. כתוצאה מכך, השברים נפרדים לרצועות בגדלים שונים שזוהרות.
גלאי מבוסס לייזר מודד את הקרינה של כל פס ומתעד אותה כאלקטרופרוגרמה המציגה DNA בגדלים שונים כשיא מובהק.
לפני שמתחילים, הביאו את תרכיז צבע ה-DNA, מטריצת ג'ל ה-DNA, סמן ה-DNA, סולם ה-DNA ודגימות ה-DNA המטוהרות לטמפרטורת החדר. הגדר את תחנת ההתחלה על ידי החלפת המזרק והתאמת לוחית הבסיס. לאחר מכן, שחררו את הידית של תפס המזרק והחליקו אותו למצב העליון.
הפעל את תוכנת הגודל והכן את תערובת צבע הג'ל. מערבלים את תרכיז הצבע למשך 10 שניות, ומסובבים אותו כלפי מטה. לאחר מכן, הוסף 25 מיקרוליטר מהצבע לבקבוקון מטריצת ג'ל, ומערבל את התמיסה לערבוב.
מעבירים את תערובת צבע הג'ל למסנן ספין. הכניסו אותו לצנטריפוגה, וסובבו אותו במשך 10 דקות בחום של 1,500 פעמים גרם. כאשר מוכנים להעמיס את תערובת צבע הג'ל, הכנס שבב DNA חדש לתחנת ההתחלה, והוסף 9 מיקרוליטר מתערובת צבע הג'ל לבאר המסומנת ב-"G".
סגור את תחנת ההתחלה, וודא שהבוכנה ממוקמת בסימן של 1 מיליליטר. לחץ על בוכנת המזרק כלפי מטה, עד שהיא מוחזקת על ידי הקליפ. המתן 30 שניות בדיוק ולאחר מכן שחרר את הסרטון. המתן 5 שניות נוספות ואז משוך לאט את הבוכנה בחזרה למצב של 1 מיליליטר.
פתח את תחנת ההתחלה והוסף 9 מיקרוליטר תערובת צבע ג'ל לבארות המסומנות ב- "G". הוסף 5 מיקרוליטר של סמן לבאר המסומנת בסמל סולם, וכל אחת מ-12 בארות הדגימה.
הוסף 1 מיקרוליטר של הסולם לבאר עם סמל הסולם, ומיקרוליטר אחד של מוצר ה- PCR או מים לבארות הדגימה. מערבול את השבב למשך דקה אחת עד 2,400 סל"ד. הכנס אותו לביואנלייזר, והפעל את השבב תוך חמש דקות.