התמקדות איזואלקטרית בפאזה נוזלית: טכניקת אלקטרופורזה להפרדת מולקולות ביו-אקטיביות מתמצית ג'ימנמה סילבסטר גולמית

התחל עם מיקוד איזואלקטרי שהורכב מראש, תא IEF - יחידת אלקטרופורזה בשלב נוזלי. עמוד זה הוא תא נקבובי ממודר ואופקי עם מסופים חיוביים ושליליים מובהקים בקצותיו.

כעת, קחו את תמצית הצמח המכילה תערובת מורכבת של רכיבים טעונים באופן שונה עם נקודות איזואלקטריות משתנות, pI - pH שבו המטען הנקי על מולקולה הוא אפס.

התמצית מתווספת באמפוליטים של מטענים משתנים המאפשרים את הפיצול של רכיבי הדגימה מאוחר יותר.

טען את הדגימה ליציאות הטעינה של העמודה. נכון לעכשיו, לעמודת IEF יש pH קבוע. לאחר מכן, הפעל מתח גבוה כדי להתחיל את האלקטרופורזה.

תחת השדה החשמלי, האמפוליטים המסיסים נודדים לעבר אלקטרודות טעונות הפוכות ויוצרים שיפוע pH ליניארי על פני העמודה. רכיבי הדגימה מתחילים לנדוד דרך שיפוע ה-pH של הפאזה הנוזלית, ואלה הממוקמים ב-pH מתחת ל-pI שלהם נושאים מטען חיובי נטו.

אלה נודדים לעבר האלקטרודה השלילית עד שהרכיבים מגיעים ל-pI שלהם, שם המטען שלהם מנוטרל והנדידה נעצרת. באופן דומה, רכיבים ב-pH מעל ה-pI שלהם נודדים לעבר האלקטרודה החיובית ונעצרים כשהם מגיעים ל-pI שלהם. זה מפריד רכיבי דגימה על סמך ה-pI שלהם לתאים ממוקדים. קצרו את השברים המטוהרים לניתוח נוסף.

הוסף 0.6 גרם תמצית צמח ג'ימנמה סילבסטרה ל-60 מיליליטר מים מזוקקים. ממיסים את תמצית הצמח על ידי ערבוב בצינור רולר למשך חמש דקות.

כדי להסיר את החלקיקים הבלתי מסיסים, צנטריפוגה את התמיסה ב-10,000 x גרם למשך חמש דקות. העבירו את הסופרנטנט לכוס זכוכית של 150 מיליליטר, והוסיפו אמפוליט ליצירת תמיסה של 1% בנפח, כ-0.6 מיליליטר.

בעזרת מזרק של 50 מיליליטר, עם מחט קהה בגודל 1.5 אינץ' ו-19 אינץ', טען את התמיסה לתא IEF דרך יציאות איסוף הדגימות. לאחר מכן, הסר את התא מהמעמד והקש על תא האלקטרודות כדי לעקור ולהסיר בועות.

חבר את היחידה למי הקירור. כאשר הכוח המסופק הוא 15 וואט קבוע, התחל בפיצול. הפעל את יחידת ה- IEF עד שהמתח מגיע לערך קבוע, כשלוש שעות.

לאחר לחיצה על כפתור Harvest ON, יישר את סיכות אספן השברים עם יציאות האיסוף. דחוף את הסיכות דרך סרט האיטום כדי להתחיל לאסוף את שברי הג'ימנמה סילבסטרה.