אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 3:11 דק׳ • July 8th, 2025
התחל עם מיקוד איזואלקטרי שהורכב מראש, תא IEF - יחידת אלקטרופורזה בשלב נוזלי. עמוד זה הוא תא נקבובי ממודר ואופקי עם מסופים חיוביים ושליליים מובהקים בקצותיו.
כעת, קחו את תמצית הצמח המכילה תערובת מורכבת של רכיבים טעונים באופן שונה עם נקודות איזואלקטריות משתנות, pI - pH שבו המטען הנקי על מולקולה הוא אפס.
התמצית מתווספת באמפוליטים של מטענים משתנים המאפשרים את הפיצול של רכיבי הדגימה מאוחר יותר.
טען את הדגימה ליציאות הטעינה של העמודה. נכון לעכשיו, לעמודת IEF יש pH קבוע. לאחר מכן, הפעל מתח גבוה כדי להתחיל את האלקטרופורזה.
תחת השדה החשמלי, האמפוליטים המסיסים נודדים לעבר אלקטרודות טעונות הפוכות ויוצרים שיפוע pH ליניארי על פני העמודה. רכיבי הדגימה מתחילים לנדוד דרך שיפוע ה-pH של הפאזה הנוזלית, ואלה הממוקמים ב-pH מתחת ל-pI שלהם נושאים מטען חיובי נטו.
אלה נודדים לעבר האלקטרודה השלילית עד שהרכיבים מגיעים ל-pI שלהם, שם המטען שלהם מנוטרל והנדידה נעצרת. באופן דומה, רכיבים ב-pH מעל ה-pI שלהם נודדים לעבר האלקטרודה החיובית ונעצרים כשהם מגיעים ל-pI שלהם. זה מפריד רכיבי דגימה על סמך ה-pI שלהם לתאים ממוקדים. קצרו את השברים המטוהרים לניתוח נוסף.
הוסף 0.6 גרם תמצית צמח ג'ימנמה סילבסטרה ל-60 מיליליטר מים מזוקקים. ממיסים את תמצית הצמח על ידי ערבוב בצינור רולר למשך חמש דקות.
כדי להסיר את החלקיקים הבלתי מסיסים
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים