אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 7:37 דק׳ • July 8th, 2025
לאלקטרופורזה דו-ממדית של ג'ל של תערובת חלבונים שמקורה ברקמת גידול הומוגנית, יש לטפל במאגר המכיל צ'אוטרופים, חומר ניקוי zwitterionic וחומר מחזר. צ'אוטרופים וחומרי ניקוי מפרקים ומסיסים את החלבונים. חומרי הפחתה מפחיתים את קשרי הדיסולפיד של החלבונים, יוצרים קבוצות תיול חופשיות ופותחים את החלבונים לרזולוציה אופטימלית של החלבון.
העבירו את תערובת החלבון המטופלת לשיפוע pH משותק, IPG, מחזיק רצועה. הנח רצועת IPG הכוללת שיפוע pH ליניארי בתוך מטריצת הג'ל האקרילאמיד. הוסף שמן מינרלי למניעת אידוי תמיסת חלבון. העבר את המחזיק למערכת IEF עם מיקוד איזואלקטרי. אפשר לתמיסת החלבון להחזיר לחות לרצועה.
בצע IEF של הממד הראשון. הזרם החשמלי גורם לחלבונים טעונים לנדוד דרך שיפוע ה- pH לעבר אלקטרודות טעונות הפוכות, ומשתקים בנקודות האיזואלקטריות שלהם - pH שבו לחלבונים יש מטען נטו אפס.
לאחר IEF, טפל ברצועת ה-IPG עם נתרן דודציל סולפט, SDS, חומר ניקוי אניוני המעניק מטען שלילי לחלבונים. שיווי משקל עם חומר אלקילציה כדי לשנות את קבוצות החלבון תיול, מה שמבטיח מסיסות חלבון במהלך אלקטרופורזה.
טען את הרצועה על ג'ל ממיס פוליאקרילאמיד בעל נקבוביות קטנות מראש ואבטח עם אגרוז מותך. מלאו את התאים במאגר אלקטרופורזה המכיל SDS. ליזום אלקטרופורזה של הממד השני, בניצב ל-IEF.
חלבונים בעלי משקל מולקולרי גדול יותר וטעונים שלילית נעים ד
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים