אלקטרופורזה של ג'ל זימוגרפיה: טכניקה אלקטרופורטית לזיהוי מטאלופרוטאזות מטריקס על ידי הערכת הפעילות האנזימטית

מטריקס מטאלופרוטאינאז, או MMP, פרוטאז רב-תחומי, המורכב מפרופפטיד ותחומים קטליטיים, מופרש כאנזים לא פעיל או זימוגן על ידי תאים ספציפיים. האינטראקציה בין יון האבץ בתחום הקטליטי לבין שאריות ציסטאין בתחום הפרופפטיד שומרת על ה-MMP לא פעיל.

כדי לזהות MMPs בתרבית תאים על ידי אלקטרופורזה של ג'ל זימוגרפיה, מלא את מיכל האלקטרופורזה המכיל קלטת ג'ל עם נתרן דודציל סולפט או מאגר ריצה המכיל SDS.

טען את הסופרנטנט התרבית מעורבב עם בופר העמסה, ואחריו תקני חלבון, לבארות של ג'ל פוליאקרילאמיד, קופולימר עם מצע חלבון ספציפי ל-MMP.

SDS, חומר ניקוי בעל מטען שלילי, בתנאים שאינם מפחיתים, משבש את אינטראקציות הציסטאין-אבץ ב-MMPs ומפרק את החלבונים תוך הקניית מטען שלילי.

בצע אלקטרופורזה. השדה החשמלי גורם לחלבונים הטעונים שלילית לנדוד לעבר האנודה הטעונה חיובית, מה שגורם להפרדה מבוססת גודל של חלבונים.

לאחר אלקטרופורזה, יש לטפל בג'ל עם מאגר רנטורינג לא יוני המכיל חומר ניקוי. חומרי ניקוי לא יוניים מחליפים SDS, מחדשים חלבונים ומחזירים חלקית את פעילות ה-MMP. MMPs מעובדים למצב פעיל לחלוטין.

דגירה במאגר מתפתח המכיל קטיוני מתכת דו-ערכיים החיוניים לפעילות MMP. MMPs פעילים, יחד עם קטיונים, מעכלים את מצע ה-MMP בג'ל. שוטפים את הג'ל כדי להסיר את המוצרים המעוכלים. מכתים את הג'ל.

אזורי הפעילות של MMP, נטולי מצע MMP, מופיעים כרצ