אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 3:16 דק׳ • July 8th, 2025
פוספוליפידים הם שומנים מורכבים המכילים קבוצות פוספט. מולקולות אלו עוברות הידרוליזה על ידי אנזים הנקרא פוספוליפאז.
כדי לבצע את בדיקת פעילות הפוספוליפאז, יש ליטול תחליב חלמון עשיר בפוספוליפידים, המשמשים כסובסטרט לאנזים. מוסיפים את החלמון לתמיסת אגרוז חמה המכילה נתרן כלורי, המשפרת את יציבות חלבוני החלמון בשלבים הבאים.
משלימים את התערובת עם סידן כלורי וצבע פלורסנט - רודמין. יוצקים את התערובת לצלחת פטרי. עם ההתמצקות, פוספוליפידים החלמון נשארים מפוזרים באופן הומוגני במטריצת ג'ל האגרוז.
בעזרת צינור, צור בארות במרחק מתאים בג'ל. הוסף לבארות ריכוזים משתנים של תמצית חלבון גולמי המכילה פוספוליפאז. דגרו את הצלחת בטמפרטורה פיזיולוגית.
הפוספוליפאז מהתמצית מתפזר באופן רדיאלי לתוך הג'ל. יוני סידן בג'ל נקשרים לפוספוליפאז ומפעילים את האנזימים. אנזים זה מבקע את הפוספוליפידים ויוצר חומצות שומן חופשיות. מולקולות הרודמין בג'ל יוצרות קומפלקס עם חומצות השומן המשתחררות.
עם הארה באור אולטרה סגול, שימו לב להופעת הילות פלואורסצנטיות סביב הבארות. ההילה מאשרת את קיומה של פעילות אנזימים. עם ריכוזים גבוהים יותר של פוספוליפאז, מולקולות האנזים מתפזרות עוד יותר, ומגדילות את קוטר ההילה.
שוטפים ביצת עוף אחת עם 1% SDS במים מזוקקים, ומפרידים את החלמון מחלבון הביצה בתנאים סטריליים.
הכן פתרונות A, B, C ו-D. הוסף 500 מיקרול
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים