בדיקת כיראליות תא בצורת טבעת בצורת טבעת: טכניקת מבחנה לקביעת כיראליות רב-תאית בהתבסס על יישור תאים על מיקרו-תבניות בצורת טבעת

כדי לקבוע כיראליות של תאי יונקים במבחנה - ההטיה השמאלית-ימינה של התאים ליישור בכיוון שמאלה או ימינה בתנאים מגבילים - התחל עם שקופיות מצופות זהב בהתאמה אישית בצלחת מרובת בארות המכילה מדיה. השקופיות מורכבות ממיקרו-תבניות של איים בצורת טבעת של פיברונקטין מקדם הידבקות תאים, ממולאים בשכבה חד-שכבתית עמידה להדבקה עצמית.

לאחר מכן, זרעו נפח מתאים של תרחיף תאי יונקים על המגלשות ודגרו. התאים נספגים על המיקרו-דפוסים הטבעתיים המכילים פיברונקטין. השכבה החד-שכבתית בהרכבה עצמית שמסביב מונעת חיבור תאים לא ספציפי מחוץ לגבולות הטבעת.

החלף את המדיה, הסר את כל התאים הלא מחוברים, במדיה חדשה. הוסף תרופה מפריעה לאקטין לסט אחד של שקופיות ודגירה.

התאים הדבוקים מתרבים, מתפשטים ולובשים את צורת איי הפיברונקטין הבסיסיים, תוך ארגון מחדש של סיבי האקטין שלהם בתגובה לרמזים המרחביים, המגבילים את התא חד-שכבתי, ומקדמים יישור מוטה.

כעת, טפל בשקופיות עם פרפורמלדהיד לקיבוע תאים. תחת מיקרוסקופ ניגודיות פאזה, התאים במיקרו-דפוסי הטבעת מופיעים כאזורים כהים עם קווי מתאר בהירים מיושרים בהתאם להטיה המועדפת שלהם.

באמצעות תוכנה, חשב את זווית היישור של כל תא כסטייה מהכיוון ההיקפי של הטבעת. ממוצע לקביעת כיראליות תאי היונקים. תאים שטופלו בתרופות המפריעים לאקטין עשויים להפגין כיראליות הפוכה.

לפני זריעת התאים יש לחמם את המדיה והטריפסי