בדיקת ספיגת שלפוחית חוץ-תאית: שיטה לדמיין ולכמת ספיגה תאית של שלפוחיות חוץ-תאיות באמצעות טכניקת הדמיה פלואורסצנטית תלת-ממדית
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 5:25 דק׳ • July 8th, 2025
כדי להקל על התקשורת התאית, תאים מפרישים שלפוחיות חוץ-תאיות, EVs - מבנים בגודל ננו הסגורים בקרום שומנים. EVs נושאים מטענים ביולוגיים שונים, כולל מקרומולקולות ומטבוליטים, להעברתם לתאים המקבלים.
כדי לדמיין את קליטת EV על ידי תאים באמצעות מיקרוסקופיה קונפוקלית, ראשית, קח EVs מבודדים טריים. רכבים חשמליים אלה מסומנים מראש עם נוגדנים הקשורים לבדיקה פלואורסצנטית להדמיה קלה לאחר מכן.
הוסף נפח מספיק של EVs עם תווית פלואורסצנטית לתרבית תאים נמענת דביקה. דגירה לתקופה הרצויה. במהלך הדגירה, תת-אוכלוסייה של הרכבים החשמליים המסומנים נצמדת באופן שטחי למשטח התא, בעוד שרכבים חשמליים אחרים מופנמים.
הוסף צבע פלואורסצנטי אחר כדי לתייג את הציטופלזמה של התא, ועוזר להבחין בין EVs מופנמים לאלה המודבקים לתא המקבל. מקם את התאים תחת מיקרוסקופ קונפוקלי ותמונה במישורי מוקד שונים לאורך ציר ה-z, ורכש סדרה של חתכים אופטיים על פני עובי הדגימה.
הרכיב אוסף זה של קטעים אופטיים - מחסנית z - ליצירת תמונת מדגם תלת מימדית ברזולוציה גבוהה. החל רינדור וירטואלי - תהליך שלאחר הדמיה - כדי לשחזר את משטחי התא.
כדי להבדיל בין רכבים חשמליים שהודבקו באופן שטחי לבין רכבים חשמליים מופנמים, עבדו אותם כנקודות בגוונים שונים. חשב את נפח התא ומספר הרכבים החשמליים שהופנמו על ידם, תוך כימות קליטת EV לכל תא.
זרע 4 x 104 תאי PC3 לצלחת של 35 מי
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים