אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 4:27 דק׳ • July 8th, 2025
נוגדנים מנטרלים, או NAbs, מופרשים על ידי תאים כדי להגן עליהם מפני נגיפים פולשים.
כדי לחקור את האינטראקציות של NAbs עם וירוסים, השתמשו בחלקיקים דמויי וירוסים מהונדסים, או VLPs. מבנים ננומטריים אלה מכילים מכלול של חלבונים שמקורם בנגיף ללא חומר גנטי נגיפי, מה שהופך אותם ללא מדבקים. VLPs מוקפים בשכבת שומנים דו-שכבתית המוטמעת בגליקופרוטאינים של מעטפת אנטיגנית, המציגים אפיטופ מנטרל, אזור מיוחד שאליו נקשרים ה-NAbs.
הוסף את ה-VLPs לשפופרת המכילה נוגדנים מנטרלים הקשורים לחרוזים מגנטיים מצומדים לחלבון. דגירה תחת תסיסה כדי למנוע מהחרוזים להתייצב. במהלך הדגירה, אזור האפיטופ של ה-VLPs מזהה את הפרטופ המשלים באזור Fab של ה-NAbs, וכתוצאה מכך קומפלקסים של אנטיגן-נוגדנים. זה, בתורו, עוזר לחרוזים המגנטיים ללכוד את ה-VLP.
הנח את הצינור במתלה הפרדה המצויד במגנט חזק. בהשפעת שדה מגנטי, החרוזים המורכבים עם VLPs נעים לעבר המגנט מבלי להפריע לאינטראקציה בין אנטיגן לנוגדנים. שלב זה לוכד את ה-VLPs הקשורים, בעוד אלה שחסרים אנטיגנים ספציפיים נשארים בסופרנטנט.
השליכו את ה-supernatant, ושטפו את הגלולה עם מאגר כביסה כדי להסיר VLPs לא קשורים. השעו מחדש את קומפלקסי חרוזי ה-VLP במאגר פליטה, מה שגורם ל-VLPs להתנתק מהחרוזים ולהופיע ב-supernatant.
שאפו את ה-VLPs המבודדים המציגים אנטיגן לתוך שפופרת חדשה, ואחסנו אותם בקירו
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים