בדיקת עכבה מבוססת מערכים תלת תאים: טכניקת ניתוח בזמן אמת להערכת פוטנציאל פולשני של תאים סרטניים על ידי מדידת עכבה חשמלית

0 views • 5:04 min • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

תאי סטרומה הקשורים לסרטן מפרישים גורמים כימיים שיכולים לעורר את תאי הגידול הגרורתיים השוכנים על קרום הבסיס של הרקמה. כתוצאה מכך, תאי הסרטן פולשים לקרום הבסיס ונודדים לעבר החלל החוץ-תאי של הרקמה.

כדי למדוד את היכולת הפולשנית של תאים סרטניים במבחנה, התחל עם צלחת מרובת בארות עם מספר מערכים תלת-תאיים. בכל מערך, בתא התחתון יש תרבית דבקה של תאי סטרומל. החדר העליון עם מיקרו-אלקטרודות למדידת עכבה התמזגו - אלקטרודות זעירות המודדות את הפעילות החשמלית של התא - מכוסה על ידי תאים סרטניים, הנצמדים לקרום המיקרו-נקבובי המצופה מטריצה חוץ-תאית הקיים מעל האלקטרודות.

במהלך הדגירה על מנתח מבוסס עכבה, תאי הסטרומה משחררים גורמים כימוטקטיים לתווך, הנעים לעבר תאי הסרטן. גורמים אלה עוברים דרך הממברנה החדירה למחצה הקיימת בצד התחתון של החדר האמצעי.

הגורמים המופרשים על ידי תאי סטרומה מאותתים לתאי הסרטן הדבקים להפוך לפנוטיפים פולשניים. בתגובה, התאים הפולשניים נודדים דרך הממברנה המיקרו-נקבובית ומגיעים לאלקטרודות המשולבות בצד הנגדי של הממברנה.

עם הזמן, ככל שיותר תאים סרטניים נדבקים לאלקטרודות, הם גורמים לעכבה תאית - הפרעה לזרימת הזרם על ידי התאים. מדידת העכבה התאית מעידה על הפוטנציאל הפולשני של תאים סרטניים.

הנח את כל שלושת החדרים הסטריליים במכסה המנוע. אתר את הכפתור בצד הקצר של החדר התחתון, וכוון את החדר התחתון כך שהכפתור פונה לנסיין.

הוסף 30,000 עד 50,000 תאים ב-90 מיקרוליטר מדיה לכל באר מהחדר התחתון מבלי ליצור בועות. השתמש ב-5% מהמצע המוסף בסרום בקר עוברי בשני חדרים תחתונים כבקרה חיובית על תנועתיות התאים, והשתמש ב-0% בתוספת סרום כבקרה שלילית.

סובב את החדר התחתון ב 90 מעלות לאחר שנתן לו להתייצב במשך 10 עד 15 דקות במכסה המנוע. לאחר מכן, הניחו את החדר האמצעי למעלה, כך שהכפתור בתא התחתון יחליק לתוך החריץ בתא האמצעי. דחוף את החדר אנכית כלפי מטה, עד שנשמע קליק מכל אחד מהצדדים הארוכים של המכלול.

הוסף 160 מיקרוליטר של מדיה נטולת סרום לכל הבארות של החדר האמצעי. ודא שמניסקוס בצורת כיפה נראה לאחר מילוי הבארות, והנח את החדר העליון, כשהאלקטרודות פונות כלפי מטה, על החדר האמצעי כדי ליישר את הנקודות הכחולות בתא האמצעי והעליון. דחוף את החדר אנכית כלפי מטה עד שנשמע צליל לחיצה מכל אחד מהצדדים הארוכים של המכלול.

הוסף 20 עד 50 מיקרוליטר של מדיה נטולת סרום לתא העליון. הרכיבו את המכלול על מנתח התאים הדו-תכליתי בחממת תרבית הרקמה, והמתינו 30 דקות לפני מדידת הרקע.

פתח את תוכנת מנתח התאים, ולאחר מכן בחר את העריסה לשימוש, ולאחר מכן לחיצה על הכרטיסייה 'הודעה', וודא שכתוב 'חיבורים בסדר' כדי להבטיח שהמערך ממוקם היטב בעריסה והאלקטרודות מיושרות היטב עם החיישנים.

לחץ על הכרטיסייה 'הערות ניסוי' ומלא את כל המידע האפשרי על הניסוי. לאחר מכן, לחץ על הכרטיסייה 'פריסה' ומלא את התיאור של פריסת המערך. לאחר מכן, לחץ על הכרטיסייה 'לוח זמנים' והוסף שני שלבים מתפריט 'שלבים'; שלב רקע עם סוויפ אחד, וצעד בדיקה עם 100 סריקות.

לאחר שהמערך היה בחממת מנתח התאים הדו-תכליתי במשך 30 דקות, לחץ על כפתור 'הפעל' כדי להתחיל במדידת רקע.

לאחר ביצוע מדידת הרקע, הסר את המערך מהעריסה והנח אותו בחזרה במכסה המנוע של תרבית התאים. לאחר מכן, הוסף 30,000 עד 50,000 תאים ב-100 מיקרוליטר של מדיה נטולת סרום לכל באר בתא העליון. אלה התאים שהאלקטרודה תזהה ברגע שהם יעברו בהצלחה דרך הממברנה.

הניחו למכלול לעמוד במכסה המנוע למשך 30 דקות לפני ההרכבה על מנתח התאים הדו-תכליתי למדידת עכבה.

הכנס את המערך בחזרה למנתח התאים הדו-תכליתי, ובדוק בכרטיסייה 'הודעה' עבור ההודעה 'חיבורים בסדר'. לחץ על כפתור 'הפעל' כדי להתחיל במדידת עכבה, ולאחר מכן לחץ על הכרטיסייה 'עלילה' כדי לעקוב אחר התקדמות האות.

אם מגיעים לנקודת הקצה לפני 25 שעות, לוחצים על השלב 'ביטול' מהתפריט הנפתח 'ביצוע'. כדי לייצא נתונים, לחץ לחיצה ימנית על הגרף, בחר 'העתק' בפורמט הרשימה ולאחר מכן הדבק את הנתונים בגיליון אלקטרוני.

06:36

השתנה במבחנה פלישת Assay כדי לקבוע את התפקיד הפוטנציאלי של הורמונים, ציטוקינים ו / או גורמי גדילה בפלישת תאי הסרטן המתווך

Related Videos

0 Views

09:36

מבחני הדמיה לחיות תאים מחקר המוח גליובלסטומה גידול תאי גזע ההעברה, הפלישה

Related Videos

0 Views

08:12

השימוש של העכבר בתאי סרטן הגידול בתוך שיטת הפלישה מחוץ למבחנה כמדד של התנהגות התא אונגניים

Related Videos

0 Views

08:51

טכניקה מבוסס למדוד את הפלישה של monolayer תא האנדותל על ידי תאים סרטניים חשמל התנגדות בזמן אמת

Related Videos

0 Views

03:52

ניתוח מבוסס עכבה תאית לניטור תהליכים תאיים בזמן אמת

Related Videos

0 Views

05:15

מדידות מבוססות עכבה של פלישת תאי סרטן המוח

Related Videos

0 Views

12:30

חשמל Cell-מצע עכבת חישה לכימות של האנדותל למניעת הפצת נשק, תפקוד מחסום, ותנועתיות

Related Videos

0 Views

08:23

Analyzer הנייד מבוססת עכבה בזמן אמת ככלי להתוות מסלולים מולקולריים מעורבים ברעילות העצבית וneuroprotection בקו תאים עצבי

Related Videos

0 Views

10:16

חומוס לב הפלישה Assay עבור בדיקת הפולשנות של תאי סרטן והפעילות של תרכובות פוטנציאלית אנטי-פולשנית

Related Videos

0 Views

12:47

חידוש ערוכים Microelectrodes זהב מצויד מנתח תא בזמן אמת

Related Videos

0 Views

Last updated: 18 July 2026