Name: Matrigel מבוסס גיבוש Tube Assay להעריך את פעילות Vasculogenic של תאים סרטניים (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-09-07T13:00:00.000+00:00
Duration: 4 min
Description: למדו להעריך פעילות וסקולוגנית של תאים סרטניים באמצעות מבחן Tube Formation על Matrigel. שיטה זו מאפשרת למדוד יצירת כלי דם בתרבית ולחזות התנהגות גידולים בגוף החי.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

עבודה זו נתמכה על ידי NCI R01 CA120659 (RS).

1. Matrigel מבוסס גיבוש Tube Assay להעריך את פעילות Vasculogenic של תאים סרטניים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנת תאים סרטניים לתאי אנדותל כלי הדם: גידול במוח תאים כגון U87 תאים, התאים B16F1 מלנומה, סרטן השד MDA-MB-435, ותאי המעי הגס HCT116 גדלו DMEM בתוספת 10% FBS ו פניצילין / סטרפטומיצין (כולם Invitrogen ). האנדותל קו התא בתאי אדם אנדותל כלי הדם (HMVECs) היו בתרבית בינוני EBM2 (Lonza) בתוספת הידרוקורטיזון מיקרוגרם / מ"ל ​​ו - 1 1 ng / ml גורם הגדילה באפידרמיס, 10% FBS ו פניצילין / סטרפטומיצין. תאים נשטפו עם PBS שלוש פעמים מנותקת עם 0.05% טריפסין / EDTA (Invitrogen). לאחר צנטריפוגה עם 2,000 סל"ד 5 דקות, כדורי תא נשטפו שוב עם PBS. לאחר מכן, התאים pelleted נמנו עם hemocytometer. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנה Matrigel: aliquot של גורם הגדילה מופחת Matrigel (BD Bioscience) היה מחומם בטמפרטורת החדר. לפני מופשר לחלוטין, הועבר על גבי קרח נוזלי שלה הוחזק על קרח דק 'לפחות 10. ואז 50 μl של Matrigel היה מצופה כדי 96-היטב צלחות ברמה אופקי המאפשר Matrigel להפיץ באופן שווה מודגרות למשך 30 דקות ב 37 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> היווצרות Tube: תאים (1-2 x 10 4) מחדש מושעה עם סרום ללא DMEM של תאים סרטניים או EBM-2 עבור בתאי האנדותל, והעמיסו על החלק העליון של Matrigel. אם זה assay שימש למדידת ההשפעות של כמה סוכנים על פיתוח אבובית, סוכנים אלה (לגירוי או מעכבי) נוספו בינוני סרום ללא. כל קבוצה מותנית הכלול 4-6 בארות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תמונה וניתוח נתונים: לאחר דגירה על 37 מעלות צלזיוס למשך הלילה, כל אחד גם נותח ישירות תחת מיקרוסקופ. אם tubules נדרשו עבור קיבעון, 100 μl של פתרון 10% מלוחים מבוססי פורמלין נוספה בעדינות ועשר דקות מאוחר יותר, הוא היה מוכן לניתוח. תחת מיקרוסקופ עם ניגודיות שלב 10x, tubules בכל תחום היו הדמיה ו בממוצע tubules 3-5 שדות אקראי היטב כל נמנה. </li></ol> 2. נציג תוצאות: HMVECs שימשו כביקורת חיובית, כמו אלה שפותחו tubules ברור גופי התא מוארך המתחברים בצורה רשת מצולע. תאים B16F1, U87, ואת מד"א-MB-435 שפותחה tubules כלי הדם דומה לזו שהוקמה על ידי HMVECs, אבל HCT116 תאים לא (איור 1). היווצרות תא מינון תלויי הצינור נבדק U87 תאים. כפי שמודגם באיור 2, 10,000 תאים נוצרו tubules הופסק. לאחר התאים הוכפלו, רשת כלי הדם היה מוצק דומים לאלה לראות HMVECs. לעומת זאת, התאים פחות מ 5000 לא הצליחו ליצור פנוטיפ וסקולרית. <img src="/files/ftp_upload/3040/3040fig1.jpg" alt="איור 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 1"> באיור 1. היווצרות Tube המושרה על ידי HMVECs, U87, מד"א-MB-435, ו B16F1 תאים, אך לא HCT116 תאים. כל התאים (2 x 10 4) הועמסו על Matrigel ו מודגרות לילה. Tubules היו צילמו באמצעות הניגוד שלב. HMVECs שימשו כביקורת חיובית. נציג של 3-5 שדות הוצגה. בר: 100 מיקרומטר. <img src="/files/ftp_upload/3040/3040fig2.jpg" alt="איור 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="איור 2"> 2. איור U87 תא-Induced tubules במספר תלויי תא אופן. מספרים שונים של תאים U87 כפי בפינות שימשו להקמת הצינור. HMVECs שימשו בקרה חיובית. בר: 100 מ"מ.

<ol><li>Shao, R., Guo, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+microvascular+endothelial+cells+immortalized+with+human+telomerase+catalytic+protein%3A+a+model+for+the+study+of+in+vitro+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+%26+Biophysical+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">Human microvascular endothelial cells immortalized with human telomerase catalytic protein: a model for the study of in vitro angiogenesis.</a> Biochemical & Biophysical Research Communications. 321, 788-794 (2004).</li>
<li>Ribeiro, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hemostatic+properties+of+the+SV-40+transfected+human+microvascular+endothelial+cell+line+%28HMEC-1%29.+A+representative+in+vitro+model+for+microvascular+endothelium%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Res%22%5BJournal%5D)">Hemostatic properties of the SV-40 transfected human microvascular endothelial cell line (HMEC-1). A representative in vitro model for microvascular endothelium.</a> Thromb Res. 79, 153-1561 (1995).</li>
<li>Ades, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HMEC-1%3A+establishment+of+an+immortalized+human+microvascular+endothelial+cell+line%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invest+Dermatol%22%5BJournal%5D)">HMEC-1: establishment of an immortalized human microvascular endothelial cell line.</a> J Invest Dermatol. 99, 683-690 (1992).</li>
<li>Shao, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acquired+expression+of+periostin+by+human+breast+cancers+promotes+tumor+angiogenesis+through+up-regulation+of+vascular+endothelial+growth+factor+receptor+2+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+%26+Cellular+Biology%22%5BJournal%5D)">Acquired expression of periostin by human breast cancers promotes tumor angiogenesis through up-regulation of vascular endothelial growth factor receptor 2 expression.</a> Molecular & Cellular Biology. 24, 3992-4003 (2004).</li>
<li>Shao, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((YKL-40%2C+a+secreted+glycoprotein%2C+promotes+tumor+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">YKL-40, a secreted glycoprotein, promotes tumor angiogenesis.</a> Oncogene. 28, 4456-4468 (2009).</li>
<li>Basu, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+role+for+cyclooxygenase-2+in+regulating+vascular+channel+formation+by+human+breast+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">A novel role for cyclooxygenase-2 in regulating vascular channel formation by human breast cancer cells.</a> Breast Cancer Research. 8, R69-R69 (2006).</li>
<li>Scavelli, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vasculogenic+mimicry+by+bone+marrow+macrophages+in+patients+with+multiple+myeloma%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Vasculogenic mimicry by bone marrow macrophages in patients with multiple myeloma.</a> Oncogene. 27, 663-674 (2008).</li>
<li>El Hallani, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+alternative+mechanism+in+glioblastoma+vascularization%3A+tubular+vasculogenic+mimicry%5BTitle%5D)+AND+%22+Brain%22%5BJournal%5D)">A new alternative mechanism in glioblastoma vascularization: tubular vasculogenic mimicry.</a> Brain. 133, 973-982 (2010).</li>
<li>Maniotis, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+channel+formation+by+human+melanoma+cells+in+vivo+and+in+vitro%3A+vasculogenic+mimicry%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Vascular channel formation by human melanoma cells in vivo and in vitro: vasculogenic mimicry.</a> American Journal of Pathology. 155, 739-752 (1999).</li>
<li>Hendrix, M. J., Seftor, E. A., Hess, A. R., Seftor, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vasculogenic+mimicry+and+tumour-cell+plasticity%3A+lessons+from+melanoma%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Cancer%22%5BJournal%5D)">Vasculogenic mimicry and tumour-cell plasticity: lessons from melanoma.</a> Nature Reviews Cancer. 3, 411-421 (2003).</li>
<li>Folberg, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+cell+plasticity+in+uveal+melanoma%3A+microenvironment+directed+dampening+of+the+invasive+and+metastatic+genotype+and+phenotype+accompanies+the+generation+of+vasculogenic+mimicry+patterns%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">Tumor cell plasticity in uveal melanoma: microenvironment directed dampening of the invasive and metastatic genotype and phenotype accompanies the generation of vasculogenic mimicry patterns.</a> American Journal of Pathology. 169, 1376-1389 (2006).</li>
<li>Liu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prostate-specific+membrane+antigen+directed+selective+thrombotic+infarction+of+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Prostate-specific membrane antigen directed selective thrombotic infarction of tumors.</a> Cancer Research. 62, 5470-5475 (2002).</li>
<li>Sood, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+clinical+significance+of+tumor+cell-lined+vasculature+in+ovarian+carcinoma%3A+implications+for+anti-vasculogenic+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Biology+%26+Therapy%22%5BJournal%5D)">The clinical significance of tumor cell-lined vasculature in ovarian carcinoma: implications for anti-vasculogenic therapy.</a> Cancer Biology & Therapy. 1, 661-664 (2002).</li>
<li>Shirakawa, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hemodynamics+in+vasculogenic+mimicry+and+angiogenesis+of+inflammatory+breast+cancer+xenograft%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Hemodynamics in vasculogenic mimicry and angiogenesis of inflammatory breast cancer xenograft.</a> Cancer Research. 62, 560-566 (2002).</li>
<li>Ruf, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+role+of+tissue+factor+pathway+inhibitors+1+and+2+in+melanoma+vasculogenic+mimicry%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Differential role of tissue factor pathway inhibitors 1 and 2 in melanoma vasculogenic mimicry.</a> Cancer Research. 63, 5381-5389 (2003).</li>
<li>Seftor, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cooperative+interactions+of+laminin+5+gamma2+chain%2C+matrix+metalloproteinase-2%2C+and+membrane+type-1-matrix%2Fmetalloproteinase+are+required+for+mimicry+of+embryonic+vasculogenesis+by+aggressive+melanoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Cooperative interactions of laminin 5 gamma2 chain, matrix metalloproteinase-2, and membrane type-1-matrix/metalloproteinase are required for mimicry of embryonic vasculogenesis by aggressive melanoma.</a> Cancer Research. 61, 6322-6327 (2001).</li>
<li>Shirakawa, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vasculogenic+mimicry+and+pseudo-comedo+formation+in+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">Vasculogenic mimicry and pseudo-comedo formation in breast cancer.</a> International Journal of Cancer. 99, 821-828 (2002).</li>
</ol>

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

על מנת assay הזה להצליח, איכות Matrigel יש לבדוק תחילה. מדגם קטן ניתן לקבל BD Bioscience מראש בטווח assay באמצעות HMVECs. מוצרים אצווה שונים עשויים להציג איכויות שונה שבו הרבה מסוימים אינם מספקים מצב אופטימלי להקמת הצינור. שנית, כל הבועות יש להימנע כאשר aliquot של Matrigel נטען צלחות 96 ובכן, מפני היווצרות בועות יכולים לשבש אבובית. אם בועות קטנטנות מצויים היטב, Matrigel ניתן להעביר מיד בחזרה את הצינורות Matrigel המקורי שאמור להיות כל הזמן על הקרח במהלך הניסוי. בנוסף, נבדקו תאים יש...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> שם מגיב </th><th> חברה </th><th> מספר קטלוגי </th></tr><tr><td> DMEM </td><td> Invitrogen </td><td> 11995 </td></tr><tr><td> FBS </td><td> Invitrogen </td><td> 16000-044 </td></tr><tr><td> גורם צמיחה מופחת Matrigel </td><td> Bioscience BD </td><td> 47743-720 </td></tr><tr><td> EBM2 ערכת </td><td> Lonza </td><td> CC-3156 </td></tr><tr><td> Nikon Eclipse מיקרוסקופ TS100 </td><td> ניקון </td><td></td></tr></tbody></table>

matrigel מבוסס גיבוש tube assay להעריך את פעילות vasculogenic של תאים סרטניים

A Matrigel-Based Tube Formation Assay to Assess the Vasculogenic Activity of Tumor Cells

במהלך העשורים האחרונים, assay היווצרות צינור באמצעות גורם הגדילה מופחת Matrigel כבר מועסקים בדרך כלל כדי להדגים את פעילות angiogenic לתאי אנדותל של כלי דם במבחנה 1-5. עם זאת, הראיות לאחרונה גדל הראה כי זה assay אינו מוגבל לבחון את התנהגותו של כלי הדם ותאי האנדותל. במקום זאת, הוא גם נעשה שימוש כדי לבחון את היכולת של מספר תאים סרטניים לפתח פנוטיפ וסקולרית 6-8. יכולת זו עולה בקנה אחד עם התנהגות vasculogenic שלהם מזוהה בחיות xenotransplanted, תהליך המכונה vasculogenic חיקוי (VM) 9. יש שפע של ראיות להוכיח כי VM גידול התא בתיווך ממלא תפקיד חיוני בהתפתחות הגידול, עצמאית של אנגיוגנזה תא האנדותל 6, 10-13. לדוגמה, תאים סרטניים נמצאו להשתתף היווצרות perfused דם, כלי דם בתוך ערוץ דגימות רקמה של חולים מלנומה גליובלסטומה 8, 10, 11. כאן, אנו תיאר assay רשת צינורי ככלי שימושי להערכת הפעילות vasculogenic של תאים סרטניים. מצאנו כי כמה שורות תאים סרטניים כגון מלנומה B16F1 תאים, גליובלסטומה U87 תאים סרטן השד מד&quot;א-MB-435 תאים מסוגלים טופס tubules כלי הדם, אך יש כאלה שלא כמו סרטן המעי הגס HCT116 תאים. יתר על כן, זה פנוטיפ כלי הדם תלויה מספרים התא מצופה על Matrigel. לכן, assay זה עשוי לשמש כלי רב עוצמה למסך את הפוטנציאל של כלי הדם של מגוון רחב של סוגי תאים כולל תאים של כלי הדם, תאים סרטניים, כמו גם תאים אחרים.

Assay הקמת הצינור משמש להערכת פעילות כלי הדם של תאים סרטניים.

Matrigel מבוסס גיבוש Tube Assay להעריך את פעילות Vasculogenic של תאים סרטניים

במהלך מספר עשורים האחרונים, נעשה שימוש נפוץ במבחן יצירת צינוריות באמצעות Matrigel עם רמות מופחתות של גורמי גדילה כדי להדגים את הפוטנציאל האנגיוגני...

המטרה הכללית של הניסוי הבא היא למדוד יצירת צינוריות של סוגי תאי גידול שונים in vitro, כדרך להערכת פעילות כלי דם in vivo. מטרה זו מושגת על ידי הוספת תאי גידול על גבי matrigel כדי להשרות יצירת צינוריות. כשלב שני.תאים על Matrigel מדגירים במהלך הלילה ב-37 °C, דבר המאפשר להיווצרות הצינורות להתרחש. לאחר מכן, מצלמים את הצינורות שנוצרו על ידי כל סוג תא. כדי לכמת את מספר הצינורות הממוצע שנוצרו על ידי כל סוג תא, משיגים תוצאות המראות את היכולת הפוטנציאלית של תאים אלה להקים רשת כלי דם in vivo על בסיס מודלים של גידולים זרים (xenograft).שיטה זו יכולה לסייע במענה על שאלות מפתח בתחום חקר הסרטן, כגון כיצד למדוד פעילות כלי דם in vitro. להכנת תאי גידול, התחילו בגידול תאי מלנומה UAD seven, B 16 F1 MDA, MB 4 35, או תאי מעי גס HCT one 16. ב-DMEM בתוספת 10% FPS ופניצילין. גדלו תאי אנדותל מיקרו-וסקולריים אנושיים או H ECS במצע EBM two בתוספת 1 µg/mL הידרוקורטיזון, 1 ng/mL גורם גדילה אפידרמלי, 10% FBS ופניצילין.שטפו את התאים ב-PBS, לאחר מכן נתקו אותם באמצעות 0.05% trypsin EDTA, והשקיעו את התאים ב-2000 RRP M למשך חמש דקות. לאחר מכן, שטפו אותם שוב ב-PBS. ספרו את התאים באמצעות המוציטומטר כדי להכין את ה-matrigel המחומם.המתיקו אלוקה של 1 ml של Matrigel עם תכולת גורמי גדילה מופחתת לטמפרטורת החדר. לאחר מכן, הניחו אותה מיד על קרח למשך 10 דקות. טפטפו 50 µL לתוך הבארות של פלטת 96 בארות.ולדגירה של הפלטה ב-37 °C למשך 30 דקות, השעו מחדש 1-2 × 10⁵ תאי גידול או תאים אנדותליאליים ב-DMEM או ב-eBM2 בהתאמה, והעמיסו אותם על גבי ה-matrigel. אם בוחנים את השפעתם של ריאגנטים על התפתחות שפופיות, הוסיפו את הריאגנט למדיום נטול סרום ודגרו למשך לילה ב-37 °C. לצורך ניתוח תמונה, הוסיפו 10 µL של תמיסת פורמלין ומלח בריכוז 10% למשך 10 דקות.לאחר מכן, בצעו הדמיה באמצעות מיקרוסקופ בניגודיות פאזה תחת עדשה של 10x. ספרו את מספר הצינוריות בשלושה עד חמישה שדות אקראיים מכל באר, ולאחר מכן חשבו את הממוצע.HMCs שימשו כביקורת חיובית, שכן צינוריות אלו התפתחו מגופי תאים מוארים ומוארכים שהתחברו ליצירת רשת פוליגונית. תאי B 16 F1, U 87 ו-MDA MB 4 35 פיתחו צינוריות וסקולריות דומות לאלו שנוצרו על ידי H ecs, אך תאי HCT one 16 לא פיתחו אותן.יכולת יצירת צינורות התלויה במינון התאים נבחנה בתאי U 87. כפי שמוצג בדמות זו, 10,000 תאים יצרו צינוריות שאינן רציפות לאחר שמספר התאים הוכפל. רשת כלי דם סולידית הייתה דומה לזו שנצפתה ב-H ecs.לעומת זאת, בהתחלה עם פחות מ-5,000 תאים, לא נוצר פנוטיפ וסקולרי. לאחר צפייה בסרטון זה, תרכשו הבנה טובה לגבי האופן שבו ניתן להקים בהצלחה ניסוי של בדיקת צינוריות במטריג'ל (matrigel tube assay) למדידת יצירת צינוריות של תאי סרטן in vitro.

a-matrigel-based-tube-formation-assay-to-assess-vasculogenic-activity

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

Assay היווצרות הצינור הוא שיטה מהירה, לכימות למדידת אנגיוגנזה במבחנה. תאי האנדותל הם בשילוב עם אמצעי תקשורת מותנה ומצופים על תמצית קרום במרתף. היווצרות צינור מתרחשת בתוך שעות וצינוריות שהוקמו זה עתה לכמת בקלות.

Assay היווצרות צינור תא האנדותל ל<em&gt; במבחנה</em&gt; חקר אנגיוגנזה

אנו מתארים בדיקת פקק מטריג'ל כדי להמחיש את הפוטנציאל האנגיוגני של מאגר של גורמים המופרשים על ידי תאים סרטניים באמצעות שתי שיטות הדמיה משלימות, אולטרסאונד ואנדומיקרוסקופיה. המטריגל, ג'ל מחקה מטריצה חוץ-תאית (ECM), משמש להחדרת גורמים אנגיוגניים למארח (עכבר) המופרשים למדיה המותנית (C.M).

פונקציונליות ניטור ומורפולוגיה של כלי דם גויס על ידי גורמים מופרשים על ידי תאים מניבי גידול בצמיחה מהיר

כתב יד זה מתאר בדיקת היווצרות צינור כדי לכמת את ההשפעות של תרכובת או מצב נתון על אנגיוגנזה על ידי שימוש בהיווצרות צינור תא אנדותל בסביבה מבוקרת.

Assay גיבוש האנדותל תא Tube אסטרטגי: השוואת מטריקס ו- Growth Factor מופחתת מטריקס

מאמר זה מציג נוהל מקיף כדי להעריך במבחנה אם אנגיוגנזה קלאסי קיימת ב- hemangioblastomas (HBs) ותפקידו HBs. התוצאות להאיר את המורכבות של HB-כורוידאלית, מציע כי זו הצורה השכיחה של אנגיוגנזה הוא רק מנגנון משלים ב- HB-כורוידאלית.

נוהל מקיף כדי להעריך את ביצועי במבחנה כורוידאלית Hemangioblastoma בשם משתמש את ספרואיד הלבלוב Assay

כאן, אנו להעריך את ההשפעות של תמצית המים של רוטה הקבר על היווצרות הרשת באמצעות שימוש בשיטת היווצרות צינור על מטריצה מרתף ג.

מערכת שפופרת HUVEC להערכת השפעת מוצרים טבעיים על אנגיוגנזה

הושלתי האנדותל שנגזר מתאי גזע המושרה ביותר (iPSC-EPs) יש את הפוטנציאל לחולל מהפכה לטיפולי מחלות לב וכלי דם ולאפשר יצירת מודלים נאמנים יותר של מחלות לב וכלי דם. בזאת, כימוס של iPSC-EPs בתלת מימדי (3D) קולגן מיקרוסביבה וניתוח כמותי של הפוטנציאל הגלום בתאים אלה מתוארים.

מודל תלת מימד וצינור חישוב מתורבת לכמת את הפוטנציאל הוושלתי של iPSC-נגזר של התגובה האנטי-מגנטית

בדיקה זו משתמשת בתאי גזע עובריים של עכברים המתמיינים לגופי עובר בתרבית בג'ל קולגן תלת-ממדי כדי לנתח את התהליכים הביולוגיים השולטים באנגיוגנזה נובטת במבחנה. הטכניקה יכולה להיות מיושמת לבדיקת תרופות, מידול מחלות, ולחקר גנים ספציפיים בהקשר של מחיקות קטלניות עוברית.

במבחנה בדיקת הנבטה תלת מימדית של אנגיוגנזה באמצעות תאי גזע עובריים של עכבר לצורך מידול מחלות כלי דם ובדיקות סמים

השיטה המוצגת כאן יכולה להעריך את ההשפעה של ריאגנטים על אנגיוגנזה או חדירות כלי הדם in vivo ללא כתמים. השיטה משתמשת בהזרקת דקסטרן-FITC דרך וריד הזנב כדי לדמיין ניאו-כלי דם או דליפת כלי דם.

שונה בבדיקת תקע ג'ל מטריצת Vivo למחקרי אנגיוגנזה

הפרוטוקול הנוכחי מאפשר התאוששות של מבנים דמויי צינור שנוצרו במבחן היווצרות צינור אנגיוגנזה קלאסי במבחנה שבו תאים, כגון תאי טרופובלסט, מתארגנים במבנים דמויי נימים על גבי שכבה של מטריצת קרום בסיס חוץ-תאית. המבנים המשוחזרים משמשים לבידוד RNA וחלבונים לניתוחים ביוכימיים שונים.

התאוששות תאי טרופובלסט מבדיקת היווצרות צינורות אנגיוגנזה לניתוח ביטוי סמן התמיינות

מחקר זה מציג את בדיקת נדידת פצעי השריטה הדו-ממדית (2D) ואת בדיקת הנבטת הספרואידים התלת-ממדית (3D), יחד עם שיטות הניתוח שלהם במורד הזרם, כולל מיצוי RNA ואימונוציטוכימיה, כבדיקות מתאימות לחקר אנגיוגנזה במבחנה.

חקירת אנגיוגנזה ברמה תפקודית ומולקולרית על ידי מינוף בדיקת נדידת פצע השריטה ובדיקת הנבטת הספרואיד

למדו להעריך פעילות וסקולוגנית של תאים סרטניים באמצעות מבחן Tube Formation על Matrigel. שיטה זו מאפשרת למדוד יצירת כלי דם בתרבית ולחזות התנהגות גידולים בגוף החי.

Matrigel מבוסס גיבוש Tube Assay להעריך את פעילות Vasculogenic של תאים סרטניים

גלה סרטונים נוספים