אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 3:03 דק׳ • July 8th, 2025
ברקמות, ברזל, מינרל חיוני החיוני לתהליכים מטבוליים שונים, קיים בדרך כלל מבודד להמופרוטאינים וחלבוני ברזל שאינם הם. המופרוטאינים כוללים ברזל ברזל או הם הקשור לטבעות פורפירין, בעוד שחלבוני ברזל שאינם הם חסרים את מבנה טבעת הפורפירין וכוללים בעיקר ברזל ברזל או לא הם.
כדי להעריך את תכולת הברזל שאינו הם ברקמת הכבד של העכבר, טפל בשבר רקמת כבד של עכבר מיובש ונקצר עם ריכוזים נמוכים של חומצה הידרוכלורית וחומצה טריכלורואצטית. דגירה בטמפרטורות גבוהות כדי לעכל את הרקמה ולהקל על משקעי חלבון המושרים על ידי חומצה.
בשל ריכוזי חומצה נמוכים, ברזל שאינו הם משתחרר מהחלבונים הנלווים. ברזל הם, בהיותו קשור לטבעת הפורפירין, נותר ללא פגיעה.
לאחר הקירור, העבירו את הנפח הרצוי של סופרנטנט המכיל ברזל שאינו הם לצלחת מרובת בארות. יש להוסיף את כלטור הברזל הכרומוגני, בתופננתרולין סולפונט, BPS, בתוספת חומצה תיוגליקולית, חומר מחזר, בבופר מתאים ולדגור.
חומצה תיוגליקולית מפחיתה את כל הברזל שאינו הם לברזל ברזל, שיכול להיקשר בקלות ל-BPS ביחס של 1:3, וליצור קומפלקס יציב ביותר בצבע ורוד. בנוסף, חומצה תיוגליקולית מונעת הפרעות עקב כל קטיוני מתכת דו-ערכיים מזהמים כגון נחושת שעלולים לקיים אינטראקציה עם BPS.
הנח את הצלחת מרובת הבארות בקורא מיקרו-פלטות כדי למדוד את הספיגה של קומפלקסי הברזל-BPS הוורודים, המייצגים את ריכוז הברזל ש
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים