אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 4:46 דק׳ • July 8th, 2025
אוסטאוקלסטים, מקרופאגים מרובי גרעינים, מקלים על ספיגת עצם - פירוק רקמת העצם ושחרור מינרלים בעצם.
כדי לכמת את ספיגת האוסטיאוקלסט במבחנה, תרבית תאים חד-גרעיניים בדם היקפי אנושי בגורם מגרה מושבת מקרופאגים, M-CSF, המכילים מדיה להתמיינות לתאי אב אוסטאוקלסטים והצמדה. קציר את אבות האוסטיאוקלסט והצנטריפוגה.
פיפטה את תרחיף התאים המושעה במדיה, בתוספת M-CSF ומפעיל קולטן של ליגנד הגורם הגרעיני kappa-Β, RANKL, לבארות צלחות מרובות בארות המצופות בסידן פוספט, המחקות רכיב עצם אנאורגני. M-CSF ו-RANKL גורמים להתמיינות אב אוסטאוקלסטים ואיחוי לאוסטאוקלסטים, ומפעילים ספיגה.
אוסטאוקלסטים מופעלים נצמדים לציפוי הסידן פוספט, מארגנים מחדש את השלד הציטולוגי שלהם ליצירת אזור איטום עשיר באקטין, ומפתחים גבולות מסולסלים, המפרישים פרוטונים והידרולזות חומצה. הסביבה החומצית המתקבלת ממיסה את ציפוי הסידן פוספט, משחררת יוני סידן ופוספט ויוצרת בור ספיגה.
לאחר הדגירה יש לשטוף את הבארות, להסיר יונים מומסים. תקן וחלחל את האוסטיאוקלסטים לצביעה שלאחר מכן. מכתימים את חוטי האקטין בצבע מתאים. צבעו את הגרעינים בצבע קושר DNA. מכתימים את הסידן בציפוי הבאר בצבע קושר סידן.
תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי, אוסטאוקלסטים פונקציונליים מציגים מספר גרעינים פלואורסצנטיים וטבעות אקטין, החיוניים לתפקוד הספיגה. בורות ספיגה מופיעים כאזורים שחורים על
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים