אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 4:25 דק׳ • July 8th, 2025
בתאים פעילים מטבולית, מצעים המכילים פחמן מתחמצנים באמצעות סדרה של תגובות ביוכימיות כדי לייצר אנרגיה ולשחרר פחמן דו חמצני כתוצר לוואי.
כדי לקבוע את קצב חמצון המצע, התחל בתרבית דבקה של התאים הלא מובחנים הרצויים. השלם את התאים בתווך עם מצע מתאים המכיל פחמן רדיואקטיבי ארבע עשרה בעמוד השדרה שלו, ודגירה.
התאים צורכים את המצע ומחמצנים אותו כדי לשחרר פחמן דו חמצני עם תווית רדיו, שמתפזר מהתאים לתווך שמסביב.
העבירו את המדיום הזה למכלול לכידת גז המכיל חומצה פרכלורית כדי להרוות את התגובה. צינור זה מכיל נייר סינון ספוג נתרן הידרוקסיד המותקן בתוך מכסה הצינור. סוגרים את הכובע ודוגרים.
במהלך הדגירה, הפחמן הדו חמצני, בצורתו הגזית, משתחרר בתוך הצינור. נתרן הידרוקסיד סופג את הפחמן הדו חמצני המסומן ברדיו, ולוכד אותו בנייר המסנן. העבירו את נייר הסינון הזה לבקבוקון המכיל קוקטייל נצנוץ, ומקמו אותו בתוך דלפק הנצנוץ הנוזלי.
בתוך הדלפק, פחמן עם תווית רדיו עובר דעיכה רדיואקטיבית, ופולט חלקיקי בטא בעלי אנרגיה גבוהה. חלקיקים אלה נספגים על ידי מרכיבי קוקטייל הנצנוץ ופולטים פולסי אור, המחושבים על ידי מונה הנצנוץ.
כמות הרדיואקטיביות שזוהתה נמצאת בקורלציה עם קצב חמצון המצע בתאים.
שטפו את התאים בבארות הנוספות, פעמיים עם DPBS. נתק את התאים עם 0.25% טריפסין-EDTA. השעו מחדש 20 מיקרוליטר של תאים מעוכלים ב-DPBS עם 20 מי
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים