אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 3:57 דק׳ • July 8th, 2025
במהלך התחדשות העצם, אוסטאובלסטים - תאים יוצרי עצם - מגויסים לאתר השבור, שם הם מתרבים ומפרישים אוסטאואיד - מטריצה קולגנית. לאחר תקופת התבגרות, האוסטאובלסטים מינרלים את האוסטאואיד על ידי שקיעה מווסתת של יוני סידן ופוספט, ויוזמים סינתזת עצם חדשה.
כדי לכמת את מידת המינרליזציה של אוסטאובלסטים במבחנה, השג תרחיף אוסטאובלסטים ראשוני במדיה מתאימה. זרע את התרחיף לצלחת מרובת בארות המכילה דיסקים נקבוביים של החלפת השתלת עצם ודגירה.
הדיסקים משמשים כפיגום, המאפשר הידבקות והתפשטות של תאים.
החלף מדיה משומשת במדיה טרייה המכילה תוספים אוסטאוגניים. דגירה למשך זמן ממושך. התוספים האוסטיאוגניים מעוררים את האוסטאובלסטים לייצר ולאחר מכן מינרליזציה של מטריצת הקולגן.
לאחר הקיבוע, יש לצבוע את המטריצה המינרלית בתמיסת אליזרין אדום S, ARS. ARS, צבע טעון שלילית, נקשר ליוני סידן טעונים חיובית במטריצה, ויוצר קומפלקס בצבע אדום. הסר כתם עודף. דמיין את הלוח כדי לזהות מרבצי סידן אדומים, המרמזים על מינרליזציה של אוסטאובלסטים.
לאחר מכן, הוסף צטילפירידיניום כלוריד, CPC, תמיסה. CPC, חומר פעילי שטח טעון חיובית, בצורה מיסלרית, קומפלקס דרך קבוצות הראש שלו עם ARS טעון הפוך הקשור ליוני סידן במטריצה, מה שמקל על מיצוי צבע לתמיסה.
אוספים וצנטריפוגה את התמיסה. העבירו את הסופרנטנט המכיל קומפלקסים של צבע CPC לצלחת מרובת בארות ומדדו א
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים