אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 4:38 דק׳ • July 8th, 2025
אנדוטוקסין, רעלן חיידקי גרם שלילי הקיים על הממברנה החיצונית, הוא ליפופוליסכריד, LPS, המורכב בעיקר משומנים ופוליסכרידים, כולל ליפיד A ואנטיגן O. כאשר הוא משתחרר במהלך זיהום, הוא מזוהה על ידי מערכת החיסון, ומעורר תגובות דלקתיות מבוססות ציטוקינים.
כדי להעריך זיהום אנדוטוקסין בננו-פורמולציה של תרופה ליפוזומלית באמצעות לימולוס אמבוציט ליזאט, LAL, מבחן, הכינו צינורות תגובה, האחד מכיל את התרופה והשני מכיל את התרופה עם ריכוז אנדוטוקסין ידוע.
הוסף מגיב LAL המכיל חלבון ליזאט המתקבל מסרטן פרסה, לימולוס פוליפמוס, תאי דם או אמבוציטים. הליזט כולל פרוטאזות סרין לא פעילות - פקטור B, פקטור C, אנזים קרישה - וחלבון קרישת ג'ל, קרישה.
מערבל את הצינורות והעמיס אותם לתוך עכירות כדי למדוד את עכירות התמיסות.
בנוכחות LPS מזהם הקשור לתרופות ליפוזומליות, פקטור C הרגיש ל-LPS מופעל באופן אוטוקטליטי, אשר לאחר מכן מתבקע ומפעיל את פקטור B הממיר את האנזים מעודד הקרישה לאנזים קרישה. אנזים פעיל זה מבקע את קשרי פפטיד הקרישה ויוצר מונומרים של קואגולין.
בסופו של דבר, המונומרים מתפלמרים באמצעות אינטראקציות בין האזורים ההידרופוביים החשופים על ראשו של אחד לזנב ההידרופובי של אחר, מה שמוביל לצבירה והיווצרות של ג'ל קואגולין עכור בלתי מסיס. העכירות הנמדדת עוזרת לקבוע את ריכוז האנדוטוקסין בפורמולציה הננו.
התאוששות ספייק מחושבת
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים