בדיקת ג'ל-קריש לימולוס אמבוציטים ליזט: שיטה לזיהוי אנדוטוקסין חיידקי בפורמולציות ננו-חלקיקים

הממברנה החיצונית של חיידקים גראם-שליליים מכילה אנדוטוקסינים הנקראים ליפופוליסכרידים, או LPS. ל-LPS יש חלק אוליגוסכריד הידרופילי ואזור ליפיד הידרופובי A.

ברגע שהם נכנסים למארח, חלבונים קושרי LPS מזהים אנדוטוקסינים. לאחר מכן חלבונים אלה קושרים את הקולטנים על תאי מערכת החיסון במחזור הדם. קישור זה מפעיל את תאי החיסון, המשחררים גורמים דלקתיים. ייצור יתר של גורמים אלה מגזים את התגובה החיסונית, וגורם למוות של תאים.

כדי לזהות אנדוטוקסינים באמצעות מבחן Limulus Amoebocyte Lysate, או LAL, קח פורמולה המכילה אנדוטוקסינים הקשורים למשטח הליפופילי של ננו-חלקיקים דרך חלקיקי השומן ההידרופוביים שלהם.

הוסף מגיב LAL לצינור. מגיב זה הוא ליזאט מימי המכיל אנזימים וחלבונים לא פעילים שמקורם באמבוציטים - תאי דם של סרטני פרסה.

דגרו את הצינור כדי להקל על קשירת אנדוטוקסינים לפרו-אנזים C גורם הקרישה הלא פעיל שמקורו בליזאט, והפעילו אותו באופן אוטוקטליטי.

פקטור C המופעל מבקע פרו-אנזים נוסף, פקטור B, ויוצר פרוטאז המבקע אנזים מעודד קרישה וממיר אותו לצורה פעילה - אנזים קרישת לימולוס. אנזים זה מבקע קרישה - חלבון קרישה לא פעיל - לקוקרישין.

מונומרים של קואגולין נקשרים דרך הזנבות ההידרופוביים שלהם לראשים ההידרופוביים של מונומרים אחרים של קואגולין. פילמור עצמי זה מביא להיווצרות הומופולימר המופיע כקריש ג'לטיני בבסיס הצינור