בדיקת סינון אנזימים על בסיס הידרוג'ל פולימרי כרומוגני: שיטה בעלת תפוקה גבוהה לסינון האנזימים הפעילים בפחמימות באמצעות מצעים סינתטיים

אנזימים מפרקי פחמימות מפרקים את הפוליסכרידים המורכבים לאוליגוסכרידים קטנים יותר.

כדי לסנן את פעילות פירוק האנזים, התחל בנטילת הידרוג'לים פולימריים כרומוגניים מרובים, CPH, המוכנים על ידי צביעת פוליסכרידים בצבעי כלורוטריאזין בצבעים שונים. לאחר מכן כל פוליסכריד מקושר כימית ליצירת הידרוג'ל - מצע סינתטי לפירוק אנזימטי.

כעת, חלקו מצעי CPH שונים לבארות נפרדות של לוחית תגובה נקבובית. הוסף פתרון הפעלה ודגר אותו כדי להבטיח הפעלה אופטימלית של המצעים.

הנח את לוחית הבדיקה על צלחת מוצר ריקה. צנטריפוגה את הלוחות יחד במהירות נמוכה כדי להקל על הסרה יעילה של תמיסת ההפעלה דרך נקבוביות לוחית התגובה.

לאחר מכן, השלם את כל הבארות של צלחת התגובה באותו סוג של אנזים משפיל פחמימות במאגר מתאים השומר על pH אופטימלי לפעילות אנזימטית. אטמו את הצלחת ודגרו אותה בתסיסה קלה כדי לאפשר פיזור אחיד של אנזימים לרשת הפולימרית, מה שמאפשר להם לגשת למצע.

במהלך הדגירה, האנזים, עם פעילות מתאימה כנגד המצע, מפרק את הפוליסכרידים ב-CPH כדי לייצר אוליגוסכרידים קטנים יותר הקשורים לצבע. מוצרים אלה מסיסים, מה שהופך את התמיסה לצבעונית. סובב את הצלחות כדי לאסוף את התמיסה הצבעונית לצלחת המוצר.

באופן ספקטרופוטומטרי, קבע את ספיגת המוצר כדי למדוד את פעילות האנזים.

כדי להתחיל, הפעל את לוחית ערכת בדיקת המסנן של 96 בארות על ידי הוספת 200 מיקרו