בדיקת צביעה גרעינית דיפרנציאלית: בדיקה לקביעת ציטוטוקסיות מיטוקאן על ידי פרופידיום יודיד וצביעה כפולה של הוכסט

מיטוקנים הם סוג של תרופות המשפיעות באופן סלקטיבי על תפקוד המיטוכונדריה בתאי סרטן וגורמות לאפופטוזיס.

כדי לקבוע ציטוטוקסיות מיטוקנית, זרע תרחיף תאים המכיל תאי סרטן דביקים למחצה על צלחת מרובת בארות. טפלו בצלחת בתמיסה המיטוקנית הרצויה ודגרו.

מיטוקן נכנס לתא הסרטני כדי לשבש את פעילותו המיטוכונדריאלית ובסופו של דבר מוביל למוות של תאים בתאי סרטן רגישים למיטוקאן. טפל בתאים בתמיסת מכתים המכילה תערובת של צבע Hoechst ופרופידיום יודיד.

Hoechst, צבע פלואורסצנטי חדיר לממברנה, חודר לכל התאים ונקשר לאזור העשיר ב-AT, ומעניק פלואורסצנטיות כחולה לגרעינים של תאים חיים ומתים כאחד.

לעומת זאת, פרופידיום יודיד, צבע פלואורסצנטי אטום לממברנה, נכנס אך ורק לתאים המתים דרך החלקים הפגועים של הממברנות שלהם. הצבע משתלב בין בסיסי ה-DNA, ומעניק פלואורסצנטיות אדומה נוספת לתאים המתים. נוכחותם של שני הצבעים בגרעיני התאים האלה גורמת לתאים המתים להיראות סגולים.

צנטריפוגה את הצלחת במהירות נמוכה כדי ליישב את התאים לדיוק משופר במהלך ההדמיה. צלמו תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי, והתבוננו בשתי אוכלוסיות תאים נפרדות. ספור את המספר של שני סוגי התאים.

אחוז התאים הסגולים המייצגים את אוכלוסיית המתים בהשוואה לכלל האוכלוסייה מצביע על הפוטנציאל הציטוטוקסי של מיטוקאן הבדיקה.

התחל בהכנת תמיסות של התרכובות המעניינות בריכוז הרצוי. הקפד תמיד