בדיקת המוליזה: שיטה חוץ גופית למדידת ליזה הנגרמת על ידי סידן יונופור באריתרוציטים אנושיים
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 4:12 דק׳ • July 8th, 2025
המוליזה היא קרע של אריתרוציטים כדי לשחרר את התוכן התאי שלהם לחלל שמסביב.
כדי לבחון את ההמוליזה, התחל עם צינור המכיל אריתרוציטים בתמיסה איזוטונית נטולת גלוקוז, המכילה אלקטרוליטים, ביחס לנוזלי הגוף. תמיסה זו שומרת על אריתרוציטים שלמים, והיעדר גלוקוז גורם ללחץ תאי. זה מפעיל את התעלות הקטיוניות המאפשרות כניסת יוני סידן לחלל הציטוזולי של התא.
הוסף תמיסה המכילה ריכוז סידן-יונופור אופטימלי הקושר את יוני הסידן ומקל על הובלתם לציטוזול, וגורם לעומס יתר של יוני סידן בתוך אריתרוציטים.
זרם זה מפעיל סקרמבלאז, חלבון המעביר את הפוספוליפידים בין שכבות השומנים החד-שכבתיות של קרום הפלזמה, ומשבש את האסימטריה שלו. תופעה זו מעבירה גם פוספטידילסרין, פוספוליפיד חד-שכבתי פנימי, לשכבה החד-שכבתית החיצונית, אינדיקטור לאריפטוזיס - מוות מתוכנת של אריתרוציטים.
עלייה ביוני סידן ציטוזולי מפעילה תעלות אשלגן ומוציאה יוני אשלגן מהתא. חוסר איזון אוסמוטי מוביל לאובדן מים והתכווצות של האריתרוציט. חשיפה ארוכה יותר ליונופורים של סידן גורמת להמוליזה, וגורמת לדליפת המוגלובין לתמיסה.
תרחיף צנטריפוגה RBC ומודד את הספיגה של הסופרנטנט כדי לכמת את כמות ההמוגלובין המשתחרר מהאריתרוציטים המוליזים.
ממיסים 1 מיליגרם מלח יונומיצין-סידן ב-630 מיקרוליטר DMSO כדי להגיע לריכוז סופי של 2 מילי-מולאר. Aliquot ב -20 מיקרוליטר ומאחסנים במינוס
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים