Annexin V Binding Assay: טכניקה מבוססת פלואורסצנטיות לזיהוי אריתרוציטים אפופטוטיים באמצעות תיוג פוספטידיל-סרין
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 4:21 דק׳ • July 8th, 2025
במהלך מצבים פתולוגיים מסוימים, אריתרוציטים או תאי דם אדומים עוברים התכווצות תאים המלווה בטרנסלוקציה של פוספוליפיד הממברנה - פוספטידילסרין - מעלון הממברנה הפנימי לחיצוני, מה שמוביל למוות תאי מתוכנת, אריפטוזיס, המעורר פגוציטוזיס תאים בתיווך מקרופאגים.
כדי למדוד אריפטוזיס המושרה על ידי יונופור באוכלוסיית אריתרוציטים אנושית מבודדת באמצעות מבחן מחייב Annexin V, התחל עם אריתרוציטים תלויים במאגר נטול גלוקוז.
דלדול הגלוקוז גורם ללחץ תאי, ומפעיל חלבון ציטוזולי קינאז C, אשר לאחר מכן מפעיל תעלות סידן וגורם לזרם יוני סידן. יתר על כן, תעלות אשלגן מופעלות, מה שגורם לפליטת אשלגן והתכווצות תאים.
לאחר מכן, הוסף יונופור סידן היוצר קומפלקס יציב עם יוני סידן חוץ-תאיים. הקומפלקס מקל על כניסה ציטוזולית של יוני סידן על פני קרום התא, ומגדיל עוד יותר את ריכוז הסידן התוך תאי. זה, בתורו, מפעיל סקרמבלאז - טרנספורטר פוספוליפידים דו-כיווני - המסייע בהעברה של פוספטידילסרין מעלון קרום התא הפנימי לחיצוני, מפחית אסימטריה בקרום וגורם לאריפטוזיס.
צנטריפוגה אריתרוציטים שטופלו ביונופור. השעו מחדש את התאים במאגר מחייב המכיל סידן. הוסף תמיסת Annexin V מצומדת בצבע פלואורסצנטי.
החלבון קושר הפוספוליפידים התלוי בסידן, Annexin V, בעל זיקה גבוהה של פוספטידילסרין נקשר לשאריות הפוספטידילסרין החשופות בעלון קרום התא החיצוני
.באמצע
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים