Caco-2 cell bioassay: שיטה חוץ גופית למדידת זמינות ביולוגית של ברזל במקורות מזון מורכבים
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 3:56 דק׳ • July 8th, 2025
אנטרוציטים הם תאי מעי דק מיוחדים הממלאים תפקיד מכריע בספיגת חומרים מזינים, כולל ספיגת ברזל.
כדי להעריך את הזמינות הביולוגית של הברזל - שיעור הברזל שנבלע הנגיש לתפקודים פיזיולוגיים - יש ליטול תמיסה מחומצת המכילה את דגימת המזון. כעת, הוסף פפסין - אנזים לעיכול חלבון, מהקיבה. ב-pH חומצי, פפסין יוזם את עיכול הקיבה על ידי פירוק חלבונים תזונתיים מורכבים לפפטידים קטנים.
הוסף נתרן ביקרבונט כדי להגביר את ה-pH ולעצור את עיכול הקיבה. הוסף תמיסה המכילה אנזימי לבלב ומרה כדי לדמות את עיכול המעי. העבירו את התערובת לחלק העליון של מערכת תרבית תאים דו-קאמרית.
החדר התחתון מכיל אנטרוציטים המובחנים מ- Caco-2 - קו תאי אדנוקרצינומה במעי הגס. קרום דיאליזה מפריד בין החדר העליון לתחתון. הממברנה מאפשרת דיפוזיה של מינים בעלי משקל מולקולרי נמוך.
תערובת אנזימי הלבלב-מרה בתא העליון מפרקת פחמימות, חלבונים ושומנים ליחידות משנה קטנות יותר - ומשחררת ברזל בצורת יוני ברזל
.משפרי הזמינות הביולוגית במזון ממירים את יוני הברזל המשוחררים למצב ברזלי - מה שמגביר את מסיסותם. יונים אלה עוברים דרך הממברנה כדי להגיע לתא התחתון.
מובילי יוני מתכת בקרום התא של אנטרוציטים מסייעים בספיגת יונים ברזליים. ברגע שנכנס פנימה, ברזל נקשר לאפופריטין - חלבון אחסון ברזל וכתוצאה מכך פריטין מורכב. קצרו את התאים כדי לכמת פריטין כדי להעריך את הזמינו
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים