בדיקת דלדול גלוקוז במבחנה: שיטה מבוססת פלואורסצנטיות לכימות ספיגת גלוקוז בתאים באמצעות מדידת דלדול גלוקוז חוץ-תאי
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 5:52 דק׳ • July 8th, 2025
גלוקוז, מקור אנרגיה תאי עיקרי, נכנס לתאים דרך חלבוני טרנספורטר גלוקוז בקרום התא. גלוקוז מתפרק בציטופלזמה של התא כדי לפירובאט, דרך המסלול הגליקוליטי, ומייצר אנרגיה באמצעות אדנוזין טריפוספט, או ATP, לחילוף חומרים תאי.
כדי למדוד את ספיגת הגלוקוז התוך תאית, התחל בתרבית דבקה של פיברובלסטים בצלחת מרובת בארות. החלף את המדיה במדיה נטולת גלוקוז ודגר. התאים מפרקים את הגלוקוז הזמין כדי לייצר אנרגיה, ומגיעים למצב רעב לגלוקוז.
החלף את המדיה בקבוצה אחת של בארות במדיה נטולת גלוקוז המכילה אינסולין, ממריץ ספיגת גלוקוז ודאוקסיגלוקוז פלואורסצנטי, אנלוגי גלוקוז. טפל בקבוצה אחרת של בארות במדיה נטולת גלוקוז המכילה דאוקסיגלוקוז פלואורסצנטי.
במהלך הדגירה, אינסולין ממריץ את ההעברה של מובילי גלוקוז נוספים לקרום הפלזמה, מה שמקל על ספיגה מוגברת של דאוקסיגלוקוז פלואורסצנטי, בהיעדר גלוקוז.
דאוקסיגלוקוז עובר זרחן ואינו עובר חילוף חומרים נוסף על ידי התאים. במקביל, הריכוז החוץ-תאי של דאוקסיגלוקוז פלואורסצנטי יורד.
לאחר הדגירה, אסוף את המדיה המכילה דאוקסיגלוקוז פלואורסצנטי שאינו מנוצל. טפל בתאים באמצעות מאגר ליזה. חומר הניקוי במאגר יוצר מיצלות וממיס את ממברנות התאים, וגורם לשחרור תוכן תוך תאי.
בעזרת קורא מיקרו-צלחת, מדוד את הקרינה של התא הומוגנאט המכיל דאוקסיגלוקוז פלואורסצנטי תוך-תאי ומדיה המכילה דאוקסיגלוקוז פלוא
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים