אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 3:29 דק׳ • July 8th, 2025
תאי מעיים מייצרים מיני חמצן תגובתיים - ROS. רמות ROS מתונות שומרות על הומאוסטזיס תאי, בעוד שרמות ROS גבוהות עלולות לגרום למוות של תאים.
כדי לכמת את רמות ה-ROS במבחנה, התחל בתרבית של אורגנואידים תלת מימדיים במעי העכבר. אורגנואידים אלה מציגים ארכיטקטורת מעיים-אפיתל עם בליטות דמויות קריפטה המכילות תאי גזע ירוקים המבטאים פלואורסצנטיות. הם מכילים גם תאים מובחנים דמויי וילוס בפריפריה, המקיפים את הלומן המרכזי המורכב מתאים מתים ופסולת. כל התאים האלה מייצרים רמות שונות של ROS.
כעת, טפל באורגנואידים בבארות המיועדות באמצעות מאפנני ROS. בהתבסס על אופיים, מודולטורים יכולים לפעול כמשרים או מעכבי ROS. לאחר הדגירה למשך הזמן הנדרש, הסר את המדיום המושקע.
הוסף אנזים פרוטאוליטי לתרבית, משבש את הארכיטקטורה התלת מימדית של האורגנואידים ומשחרר תאים שונים בתרחיף. לאחר מכן, הוסף בדיקה פלואורוגנית רגישה ל-ROS ודגירה.
עם כניסתם לתאים, הגשושיות מגיבות עם ROS ומתחמצנות כדי לייצר פלואורסצנטיות אדומה. טפלו בתאים ב-DAPI - צבע פלואורסצנטי קושר DNA - שצובע באופן סלקטיבי את גרעיני התאים המתים - ויוצר ניגוד עם התאים החיים.
בעזרת ציטומטר זרימה, נתח את התאים החיים השליליים ל- DAPI כדי לקבל אות פלואורסצנטי אדום המתאים לרמת ה- ROS שלהם. בהתאם לאופי המודולטורים, המשרתים מעלים את רמות ה-ROS בעוד המעכבים מפחיתים אותן.
הוסף 1
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים