Bioreporter Assay: טכניקה רגישה באמצעות מערכת כתב Bioluminescent כדי לזהות נוגדנים SARS-CoV-2
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 3:11 דק׳ • July 8th, 2025
במהלך זיהום בתסמונת נשימתית חריפה חמורה של נגיף הקורונה 2, או SARS-CoV-2, תחום קשירת הקולטן של חלבון הספייק של הנגיף, RBD, נקשר לאנזים הממיר אנגיוטנסין 2, ACE2, מה שמקל על כניסת תאים ויראליים. בתגובה, מערכת החיסון מייצרת נוגדנים הנקשרים ל-RBD הנגיפי ומונעים כניסה תאית, ומפחיתים את ההדבקה הוויראלית.
כדי לזהות נוגדנים ל-SARS-CoV-2 המכוונים ל-RBD, קח תרחיף ביו-מדווח רקומביננטי המורכב משברי חלבון בגודל קטן, המאוחים ל-RBD ספייק של SARS-CoV-2. הוסף נוגדנים סטנדרטיים ל-SARS-CoV-2 המכוונים ל-RBD וחרוזים מגנטיים קושרים נוגדנים.
במהלך הדגירה, אזור נוגדני ה-Fc נקשר לתחומי קשירת ה-Fc של החרוזים. בנוסף, הביו-מדווח הרקומביננטי נקשר לנוגדנים המכוונים ל-RBD הקשורים לחרוזים.
לאחר הדגירה, צנטריפוגה את התערובת. הסר את הסופרנטנט המכיל ביו-ריפורטר לא כבול. השעו מחדש את החרוזים הכרוכים במאגר. מעבירים לצלחת מרובת בארות.
הוסף תמיסה המכילה שברי חלבון גדולים, בעלי זיקה גבוהה לשברי חלבון בגודל קטן. שברי חלבון גדולים וקטנים נקשרים זה לזה ויוצרים אנזים לוציפראז מהונדס פעיל.
הוסף פורימזין, מצע לוציפראז. לוציפראז מזרז את החמצון של פורימזין, וגורם לפליטת אור. בעזרת לומינומטר מודדים את הזוהר, המעיד על נוכחות נוגדנים מנטרלים.
עוצמות אות גבוהות מצביעות על ריכוזים גבוהים של נוגדנים ל-SARS-CoV-2 המכוונים ל-RBD.
על מנת
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים