In Vitro Persister Assay: שיטה להערכת ההשפעה של אוסמוליטים על התמדה חיידקית

בחשיפה לתנאי סביבה מזיקים, תת-קבוצה של חיידקים נכנסת למצב של פעילות מטבולית נמוכה, ומתחמקת מההשפעות המזיקות. חיידקים אלה, הנקראים מתמידים, יכולים לסבול חשיפה חולפת לריכוזים גבוהים של אנטיביוטיקה.

כדי לחקור את ההשפעה של אוסמוליטים - מומסים אורגניים קטנים - על התמדה חיידקית, ראשית, השג תרבית תאי חיידקים בשלב אקספוננציאלי עם מתמידים קיימים מראש מתחת לגבול הזיהוי, תלויים במדיה.

לאחר מכן, העבירו את המתלה לבארות המכילות אוסמוליט של צלחת מיקרו-מערך. שמור על סט בארות ללא אוסמוליט כשליטה. אטום את הצלחת עם קרום חדיר גז כדי לאפשר דיפוזיה מהירה של גז לצמיחת תאים ודגירה.

האוסמוליטים במדיום בריכוזים מתאימים גורמים ללחץ אוסמוטי, וגורמים לתאים מסוימים לתכנת מחדש את חילוף החומרים התאי שלהם מצמיחה מהירה לאיטית, ויוצרים מתמידים.

כעת, העבירו את התאים שטופלו באוסמוליט ותאי הבקרה ללוחית בדיקה מתמשכת המכילה אנטיביוטיקה. אטום את לוחית הבדיקה המתמשכת ודגירה.

בנוכחות אנטיביוטיקה, תאים נורמליים עוברים מוות תאי, ואילו תאים מתמידים - בהיותם עמידים לאנטיביוטיקה - שורדים. לבסוף, אספו חלק קטן מהתאים, דללו באופן סדרתי עם בופר ואתרו על צלחת אגר נטולת אנטיביוטיקה. דגרו את הצלחת.

בהיעדר אנטיביוטיקה, המתמידים ממשיכים לצמוח ומתרבים ויוצרים מושבות. ספרו את מספר המושבות על צלחת האגר.

מספר גבוה יותר של מושבות מאשר טיפול ל