בדיקת דגירה משותפת של חיידקים: טכניקה מבוססת מיקרוסקופיה פלואורסצנטית כדי לדמיין תחרות חיידקית תוך ספציפית ברמת התא הבודד

תחרות תוך-ספציפית בין שני זני חיידקים גורמת לזן המעכב לשחרר מולקולות אפקטור רעילות שהורגות את אוכלוסיית היעד.

כדי לדמיין אינטראקציות תחרותיות בין שני זני חיידקים גראם שליליים, התחל בתרבית משותפת הכוללת מעכב וזן מטרה בכמויות שוות.

שני הזנים מתוכננים לבטא חלבונים פלואורסצנטיים בצבעים שונים כדי להבדיל ביניהם חזותית במהלך ההדמיה. רכז את התרבית כדי למקסם את המגע בין תא לתא בין זני החיידקים. הבחין בתרבות המעורבת על כיסוי המונח בתחתית צלחת.

הניחו כרית אגרוז מוצקה על המקום, ואפשרו לחיידקים להשתתק, וכסו אותה בכיסוי נוסף. דגירה כדי לאפשר צמיחת חיידקים, המדמה תנאי צפיפות חיידקים.

מעטפת התא של הזן המעכב מכילה מערכת הפרשה מיוחדת - מערכת ההפרשה מסוג 6, או T6SS. הוא מורכב ממתחם ממברנה, לוחית בסיס וצינור פנימי המוקף במעטפת מתכווצת.

עם זיהוי מגע, זן המעכב מפעיל את ה-T6SS שלו, מה שגורם להתכווצות המעטפת ולגירוש הצינור, מה שמוביל בסופו של דבר לניקוב של קרום תא חיידק המטרה. זה מקל על העברת מולקולות האפקטור לחיידקי המטרה, מה שמוביל למותם.

תמונה באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי לזיהוי זני חיידקים פלואורסצנטיים שונים. מורפולוגיה עגולה של חיידקי המטרה והפחתה במספרם מאשרים הרג מוצלח על ידי החיידקים המעכבים.

מדוד ורשום את הצפיפות האופטית ב-600 ננומטר עבור כל הדגימות. נרמל כל דגימה לצפיפות אופטית של 1 על ידי דיל