אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 3:43 דק׳ • July 8th, 2025
כדי להתחיל, הכינו דילולים סדרתיים של נגיף הרפס סימפלקס, נגיף זיהומי עטוף, במאגר.
השג צלחת מרובת בארות המכילה שכבה אחת של תרבית תאי אפיתל רגישה לנגיף. החלף נפח ספציפי של מדיה במתלים ויראליים מדוללים, כדי להבטיח כיסוי חד-שכבתי אחיד. אפשר לנגיף לספוג על פני התא.
הסר את כל הווירוסים שאינם נספגים. מכסים את שכבת התא במדיה המכילה מתיל צלולוז, ויוצרים כיסוי חצי מוצק.
עם הדגירה, המעטפת הנגיפית וקרום התא מתמזגים, ומשחררים את הנוקלאוקפסיד הנגיפי הסוגר את הגנום הדו-גדילי לתוך הציטופלזמה. יתר על כן, הגנום הנגיפי משתחרר לגרעין התא.
באמצעות המנגנון התאי של המארח וחלבון הוויריון, הגנום הנגיפי מבטא חלבונים נגיפיים מוקדמים מיידיים, המווסתים את ביטוי הגנים המוקדמים. חלבונים נגיפיים מוקדמים מתווכים את שכפול ה-DNA הנגיפי.
לאחר מכן, גנים נגיפיים מאוחרים מבטאים חלבונים מבניים, אשר יחד עם הגנום הנגיפי מתאספים לייצור חלקיקי ויריון צאצאים. התאים הנגועים בנגיף משחררים ויריונים.
מתיל צלולוז מגביל את תנועת הנגיף, גורם לוויריונים להדביק רק את התאים השכנים ולאחר מכן ליזה, וליצור חורים בשכבה החד-שכבתית.
לאחר הדגירה, הסר את שכבת המתיל צלולוזה. הוסף תמיסת סגול קריסטל אתנולי. אתנול מקבע תאים ומשבית וירוסים, בעוד סגול קריסטל מכתים את התאים. כתוצאה מכך, אזורים או פלאקים ברורים מופיעים על השכבה החד-שכבתית של התא הסגול.
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים