אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 4:48 דק׳ • July 8th, 2025
מקרופאגים הם תאים חיסוניים מיוחדים שמנקים את התאים שעוברים אפופטוזיס - מוות תאי מתוכנת על ידי פגוציטוזיס.
כדי להעריך את בליעת התאים האפופטוטיים, התחל עם שקופית זכוכית המכילה תאים עובריים קבועים של דרוזופילה, כולל גופים אפופטוטיים שנבלעו על ידי המוציטים - מקרופאגים חסרי חוליות.
ראשית, טפל בתאים עם מגיב חוסם שחוסם את האתרים הלא ספציפיים. הוסף נוגדנים ראשוניים הקושרים את קולטני הקרוקומרט - סמנים פגוציטים של המוציטים. שטפו את עודפי הנוגדנים.
הוסף נוגדנים משניים המסומנים בפוספטאז אלקליין הנקשרים לנוגדנים הראשוניים. כעת, הוסף תמיסת מצע כרומוגנית מתאימה על השקף, ודגירה. במהלך הדגירה, פוספטאז אלקליין מגיב עם המצע הכרומוגני כדי להניב גרגירים מוכתמים בסגול בהמוציטים.
לאחר מכן, הוסף תערובת תגובה הכוללת טרנספראז דאוקסינוקלאוטידיל טרנספראז, אנזים TdT ונוקלאוטידים הקשורים לדיגוקסיגנין. TdT מזרז את ההצמדה של נוקלאוטידים הקשורים לדיגוקסיגנין לקצוות ה-3' OH החשופים של ה-DNA המפוצל בגופים האפופטוטיים.
לאחר מכן, הוסף נוגדנים אנטי-דיגוקסיגנין מצומדים למדווח פרוקסידאז הנקשרים לנוקלאוטידים באתר הנזק ל-DNA. לטפל בתאים בתמיסת סובסטרט כרומוגני ספציפי לפרוקסידאז, ולדגור. פרוקסידאז מזרז את חמצון המצע, יוצר משקעים צבעוניים ומכתים את הגופים האפופטוטיים בחום.
לבסוף, דמיינו את התאים תחת מיקרוסקופ אור. הנוכחות המ
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים