בדיקת אפרוציטוזה של תאים קבועים: שיטה לחקר ספיגה אפרוציטית של תאים אפופטוטיים על ידי מקרופאגים באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי

תאים העוברים אפופטוזיס - מוות תאי מתוכנת - מציגים אותות אכילה על פני התא שלהם, מה שמקל על פירוק על ידי פגוציטים - תאים חיסוניים מיוחדים. תהליך זה של פינוי תאים אפופטוטיים נקרא אפרוציטוזיס.

כדי לבצע את בדיקת האפרוציטוזיס, ראשית, קח השעיה של תאים אפופטוטיים מוכתמים כפולים. פני השטח של תאים אלה מסומנים בביוטין, והציטופלזמה מסומנת בצבע עוקב אחר תאים, ומתייג חומרים שמקורם בתאים אפופטוטיים.

הוסף את תרחיף התאים לתרבית של תאי מקרופאגים דבוקים, המתפקדים כאפרוציטים. צנטריפוגה, מאלצת מגע בין מקרופאגים לתאים אפופטוטיים, ודגירה.

קולטנים אפרוציטיים על מקרופאגים נקשרים לפוספטידילסרין - אות אכול אותי - על קרום התא האפופטוטי ומקלים על בליעתו. שברים קטנים של התא האפופטוטי נלקחים בתוך שלפוחית הקשורה לממברנה, הנקראת אפרוזום.

התוצאה היא שבר אפרוציטוזי - חלק מהתא האפופטוטי בתוך המקרופאג - ושבר לא אפרוציטוזי - החלק הלא מופנם של התא האפופטוטי

הוסף סטרפטווידין עם תווית פלואורסצנטית, הנקשר למולקולות הביוטין החשופות על פני החלק הלא אפרוציטוזי ומבדיל בין החלקים הלא מופנמים והמופנמים של התא האפופטוט.

תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי, חלק התא האפופטוטי הלא מופנם מראה תיוג סטרפטווידין, ואילו אפרוזומים מופיעים כנקודות נפרדות ללא סטרפטווידין.

כדי לכמת אפרוציטוזיס, לקבוע את מספר האפרוזומים הבדידים ולמדוד את עוצמת שברי התא