בדיקת ניטור החמצת מעיים: טכניקה לחקר החמצת לומן המעי בדרוזופילה באמצעות צבע כחול ברומופנול

המעי האמצעי של החרק מכיל אזור תאי נחושת - CCR - האחראי על החמצת המעיים. אזור זה מכיל תאי הפרשה מיוחדים - תאי נחושת - המייצרים חומצה, העוברת בתעלה הצרה שנוצרה על ידי תאי הביניים השכנים. החומצה משתחררת ללומן המעי כדי לסייע לעיכול.

כדי לעקוב אחר החמצת המעיים בדרוזופילה, קח זבובים בוגרים מורעבים למשך זמן מתאים. הניחו את הזבובים בצלחת פטרי המכילה טיפה אחת של מזון זבובים בתוספת ברומופנול כחול, או BPB - צבע אינדיקטור חישת pH. אפשר לזבובים המורעבים לחפש מזון לתקופה קבועה.

לאחר בליעת מזון, חומצה המיוצרת על ידי תאי הנחושת מגיעה ללומן המעי ומתערבבת עם המזון המכיל BPB. ב-pH חומצי, מולקולות ה-BPB עוברות פרוטונציה, מה שמשנה את צבען מכחול לצהוב - מה שמעיד על החמצה.

בסיום משך הניסוי, הנח את לוח הפטרי על קרח. טמפרטורה נמוכה מפסיקה את הפעילות העצבית-שרירית בזבובים ומרדימה אותם. הניחו זבוב בודד מתחת לסטריאומיקרוסקופ ובודדו בניתוח את מערכת העיכול השלמה.

בדוק את צבע ה-CCR כדי לקבוע את מצב החמצת המעי. צבע צהוב מעיד על החמצה, ואילו צבע כחול מעיד על היעדר החמצה.

בדקו את מערכת העיכול של כל הזבובים, וחשבו את אחוז האנשים שמציגים החמצת מעיים.

התחל לארגן את בדיקת ניטור החמצת המעיים עם הכנת מזון הזבובים עם צבע כחול ברומופנול או BPB עם חישת pH. לשם כך, ממיסים את מזון הזבובים במיקרוגל, ונותנים לו להתקרר עד שהוא פושר. הוסף 1 מיליליטר של 4% BPB ל-1 מיליליטר מהמזון הפושר עם באר ערבוב. בעזרת פיפטה, הוסף את מזון הזבוב המכיל BPB לנקודה אחת של כ-200 מיקרוליטר במרכז צלחת פטרי.

לאחר מכן, אספו זבובי Drosophila melanogaster לא בתולים בני 0 עד יומיים, ואפשרו לזבובים להתאושש ממזון קמח תירס סטנדרטי. לפני הניסוי, הרעיבו את הזבובים במשך 24 שעות בטמפרטורת החדר בבקבוקון המכיל רקמת מגבון מעבדה ספוגה בכ-2 מיליליטר מים נטולי יונים.

העבירו זבובים מורעבים לצלחת פטרי המכילה נקודות בודדות של מזון הזבובים הטרי שהוכן בתוספת 2% BPB כדי לאפשר לזבובים לחפש מזון במשך ארבע שעות בטמפרטורת החדר, בעודם חשופים לאור.

לאחר ארבע שעות אוספים את הזבובים. לאחר מכן, המשך לבודד בניתוח את המעיים של הזבובים המורדמים ב-1x PBS עם מלקחיים תחת סטריאומיקרוסקופ. ספרו את מספר הזבובים שמראים כתמי BPB חזקים במעיים, וחשבו את האחוז באמצעות המשוואה.