בדיקת חלבון מסיס לכימות תכולת חלבון מסיס ברקמות צמחים

כדי לכמת את תכולת החלבון המסיס ברקמת הצמח, בצינור, התחל בכמות מתאימה של רקמת צמח טחונה, ליופילית.

הוסף נתרן הידרוקסיד, אלקלי, לצינור וסוניקט. הסביבה האלקליין עם הכוחות המכניים משבשת את התאים, ומשחררת תוכן תוך תאי, כולל מקרומולקולות - חלבונים מסיסים ופחמימות. דגירה בטמפרטורות גבוהות יותר.

בנוכחות חום, אלקלי גורם להידרוליזה של חלבון, יוצר פפטידים קטנים יותר ומגביר את מסיסות החלבון. בנוסף, פחמימות מתכלות.

צנטריפוגה את התערובת. אסוף את הסופרנטנט המכיל חלבון מסיס. הוסף חומצה הידרוכלורית כדי לנטרל את ה-pH.

טפל בדגימה בחומצה טריכלורואצטית, TCA. TCA משבש את מעטפת ההידרציה המקיפה את החלבונים, מה שמוביל לצבירת חלבונים ומשקעים.

צנטריפוגה והסר את הסופרנטנט המכיל TCA. שטפו את כדור החלבון באצטון קר כקרח כדי להסיר שאריות TCA, שעלולות להפריע להערכת חלבון מסיס.

יבש את האצטון באוויר. השעו מחדש את כדור החלבון בנתרן הידרוקסיד. לדלל במים נטולי יונים. מעבירים לבארות של צלחת מרובת בארות.

הוסף תמיסה חומצית של צבע Coomassie Brilliant Blue G-250. בתנאים חומציים, הצבע נקשר לשאריות חומצות האמינו הבסיסיות בחלבונים המסיסים, וכתוצאה מכך קומפלקס חלבון-צבע כחול.

השתמש בספקטרופוטומטר כדי למדוד את הספיגה של קומפלקס החלבון-צבע, פרופורציונלי לתכולת החלבון המסיס ברקמת הצמח.

כדי להתחיל, שקלו דגימות משוכפלות של כל רקמה ל