בדיקה קולורימטרית לכימות פחמימות לא מבניות ברקמות צמחים

פחמימות ניתנות לעיכול הן המרכיבים הלא מבניים של רקמת הצמח, והן מתפקדות כמקור אנרגיה רזרבה לצמיחה וחילוף חומרים של צמחים.

כדי לכמת את הפחמימות הלא מבניות, קח כמות מדודה של רקמת צמח בשפופרת. הוסף חומצה גופרתית מדוללת לצינור, וחמם את הדגימה. עם החימום, חומצה גופרתית מבצעת הידרוליזה של הפוליסכרידים של הפחמימות הניתנות לעיכול ליחידות המשנה החד-סוכריות שלהן.

מצננים את הדגימה. צנטריפוגה את הצינור כדי לגלול את החומר הצמחי הלא מעוכל ולקבל סופרנטנט המכיל את החד-סוכרים.

שאפו את הסופרנטנט לצינור טרי, וטפלו בחד-סוכרים בתמיסת פנול, ואחריה תוספת של חומצה גופרתית. מערבל את הצינור כדי לערבב את התוכן ולדגור.

במהלך הדגירה, חומצה גופרתית מייבשת את החד-סוכרים כדי לייצר נגזרות פורפורליות. נגזרות פורפורליות אלה מגיבות עם הפנול ליצירת תמיסת זהב צהוב.

קבע באופן ספקטרוסקופי את הספיגה של תמיסת הזהב הצהוב ב-490 ננומטר, התואמת את תכולת הפחמימות בדגימת הצמח.

לאחר מכן, קח ריכוזים שונים של תמיסות גלוקוז וחזור על הטיפול בחומצה פנול-גופרתית כדי להניב עוצמות צבע שונות, והתווה עקומה סטנדרטית. השווה את ערך הספיגה של דגימת הפחמימות הלא ידועה עם תקן הגלוקוז כדי לקבל את תכולת הפחמימות הניתנות לעיכול ברקמת הצמח.

ראשית, שקלו שכפולים מכל דגימת רקמה לצינורות זכוכית של 15 מיליליטר. סמן את הצינורות ורשום את המסה המדויקת של כל דגימה.

לאחר מכן, הוסף 1 מיליליטר של 0.1 חומצה גופרתית טוחנת לכל צינור, וסגור היטב את המכסים. לאחר מכן, הניחו את הצינורות באמבט מים רותחים למשך שעה.

מעבירים את הצינורות לאמבט מים פושר להתקררות. לאחר מכן, שפכו את תכולת הצינורות לצינורות מיקרו-צנטריפוגה מסומנים בנפח 1.5 מיליליטר. לאחר מכן, צנטריפוגה את הצינורות ב -15,000 גרם למשך 10 דקות. השתמש במיקרופיפטה כדי להעביר את הסופרנטנט לצינורות חדשים של 1.5 מיליליטר.

בעזרת פיפטה, העבירו 15 מיקרוליטר מכל דגימה לא ידועה למבחנה משלה. לאחר מכן, הוסף 385 מיקרוליטר מים מזוקקים לכל צינור.

במכסה אדים, הוסף 400 מיקרוליטר של 5% פנול לכל מבחנה דגימה סטנדרטית ולא ידועה. מיד לאחר מכן, הוסף 2 מיליליטר חומצה גופרתית לכל צינור.

הקפידו להוסיף את החומצה הגופרתית על פני התמיסה.

לאחר דגירה של הצינורות למשך 10 דקות, מערבל את הצינורות. לאחר מכן, דגרו את הצינור למשך 30 דקות נוספות.

מעבירים 800 מיקרוליטר מכל צינור דגימה לשלוש קובטות פוליסטירן 1.5 מיליליטר למחצה. לאחר מכן, הגדר את הספקטרופוטומטר לקריאה ב-490 ננומטר, וכיול אותו עם קובטה ריקה.

לבסוף, העבירו כל קובטה דרך הספקטרופוטומטר, ורשמו את הספיגה.