אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 3:34 דק׳ • July 8th, 2025
טוקסופלזמה גונדי - פרוטוזואן חד-תאי - הוא טפיל אנאירובי מחייב, המתרבה רק בתוך תאי המארח.
כדי לכמת את הצמיחה התוך תאית של הטפיל באמצעות בדיקה מבוססת לוציפראז, קח תרחיף של תאי טפיל המבטאים לוציפראז - אנזים המייצר זוהר בתגובה עם המצע שלו. הוסף את התרחיף לתרבית של פיברובלסטים של עורלה אנושית, ודגר למשך זמן מתאים.
הטפיל נקשר לקולטני התא המארח ומופנם בתהליך אנדוציטי, ויוצר ואקואול טפילי. המבנה מספק נישה לטפיל להתרבות.
לאחר ההדבקה, שאפו את המדיום, הסירו את הטפילים הלא מופנמים. הוסף מאגר ליזה המכיל חומר ניקוי ולוציפרין - מצע ללוציפראז. חומר ניקוי במאגר יוצר נקבוביות בקרום התא ומבצע ליזה מלאה של התאים, וכתוצאה מכך שחרור לוציפראז.
האנזים המשוחרר מחמצן מולקולות לוציפרין ופולט אור. מדוד את עוצמת הזוהר כדי לקבוע את פעילות הלוציפראז. באמצעות בארות משוכפלות המכילות תאי מארח נגועים, מדוד את פעילות הלוציפראז במרווחי זמן קבועים מראש לאחר ההדבקה.
שרטט את עוצמת הזוהר המנורמל לעומת מרווחי הזמן כדי לקבל את שינויי הקפל בצמיחת הטפילים לאורך זמן. עלייה זמנית בעוצמה מעידה על התרבות טפילים מוצלחת.
התווה את הערכים בקנה מידה לוגריתמי כדי לחשב את שיפוע העקומה, המייצג את זמן ההכפלה של הטפיל.
כדי לבצע בדיקת גידול טוקסופלזמה מבוססת לוציפראז, התחל בשאיבת המדיום בזהירות מתרביות מיקרו-פלטות של 96 בארות שנזרעו מראש של
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים