בדיקת Luciferase לחקר היעילות של כימיקלים אנטי-טפיליים נגד טפילים
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 3:44 דק׳ • October 9th, 2025
טוקסופלזמה גונדי - טפיל פרוטוזואי - מתרבה אך ורק בתוך תאים מארחים בעלי חיים גרעיניים. הוא פולש לתאי המארח דרך התהליך האנדוציטי, ויוצר ואקואול טפילי. בתוך הוואקואול, הטפיל בולע חלבונים ציטוזוליים מארחים, ורוכש חומרים מזינים לצמיחה.
כדי לסנן את יעילותם של כימיקלים אנטי-פרזיטיים על טפילים בתוך תאי מארח, קח לוחית בדיקה המכילה תרבית דבוקה של פיברובלסטים של עורלה אנושית בבארות מרובות.
יש להוציא כמויות שוות של טפילי טוקסופלזמה המבטאים לוציפראז - אנזים המייצר זוהר - לכל באר. דגירה, מה שמאפשר לטפילים לפלוש לתאי המארח ולגדול בתוך הוואקואול הטפיל.
לאחר הדגירה, שאפו את המדיום, הסירו את הטפילים שלא נבלעו. השלימו את הבארות בריכוזים שונים של תרכובת אנטי-פרזיטית המכוונת לציסטאין פרוטאז, ודגרו.
מולקולות תרופות נכנסות לתא המארח כדי להגיע לטפילים. ברגע שנכנסים פנימה, התרופה מעכבת את אנזים הציסטאין פרוטאז של הטפיל, משבשת את רכישת החומרים המזינים של הטפיל הקשור למארח ועוצרת את צמיחתו.
שאפו את המדיה המכילה תרופה. הוסף מאגר בדיקה המכיל סובסטרט ספציפי לאנזים לוציפראז. רכיבי החיץ מפרקים את התאים, ומאפשרים לאנזים הלוציפראז של הטפיל לחמצן את המצע, ולייצר זוהר בהיר.
מדוד את הזוהר עבור כל ריכוזי המעכבים הכימיים. ירידה בעוצמת הזוהר עם הגדלת ריכוזי התרופות מעידה על היעילות האנטי-פרזיטית של המעכב הכימי.
כדי להערי
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים