β-בדיקת גלקטוזידאז להערכת ציטוטוקסיות הנגרמת על ידי תרופות בטפילים
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 3:40 דק׳ • April 30th, 2023
טריפנוזומה קרוזי, טפיל תוך-תאי מחייב, פולש לתאי מארח של יונקים כטריפומסטיגוט - שלב התפתחותי לא מתפשט - ומתמיין לאמסטיגוטים שאינם מסומנים, המתרבים בציטופלזמה על ידי ביקוע בינארי.
לאחר ההתפשטות, אמסטיגוטים מתמיינים בחזרה לטריפומסטיגוטים המשבשים את תאי המארח להיכנס למחזור הדם, וכתוצאה מכך זיהום מערכתי.
כדי להעריך את הפוטנציאל הציטוטוקסי במבחנה של תרופה אנטי-פרזיטית לבדיקה נגד טריפנוזומה קרוזי, התחל בתרבית של טפילי טריפנוזומה קרוזי טרנסגניים - בשלב ההתפתחותי הרצוי - המבטא ביציבות את האנזים β-גלקטוזידאז.
השעו את הטפילים במדיה מתאימה. מעבירים לצלחת מרובת בארות. הוסף ריכוזים מתאימים של התרופה האנטי-פרזיטית לבדיקה. דגירה.
התרופה מתפזרת באופן פסיבי דרך ממברנות הטפיל ועוברת חילוף חומרים לחומרי ביניים רעילים. מטבוליטים אלה נכנסים לגרעינים וגורמים לנזק ל-DNA, ומעכבים את סינתזת החלבון, כולל β-גלקטוזידאז, ומשפיעים לרעה על כדאיות הטפילים.
החלף את המדיה המכילה תרופה במאגר כדי למנוע הפרעות צבע במהלך מדידת הספיגה. הוסף את המצע עבור β-גלקטוזידאז, כלורופנול אדום גלקטופירנוזיד, CPRG - אנלוגי גלקטוזיד לא רעיל - בתוספת חומר ניקוי עדין ולא יוני. דגירה.
חומר הניקוי מבצע ליזה של הטפילים, ומשחרר β-גלקטוזידאז לתמיסה. לאחר מכן, β-גלקטוזידאז מבצע הידרוליזה של CPRG, ומייצר כלורופנול אדום, משקע בצבע אדום.
בעזרת ק
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים