טכניקת הקלטה מבוססת אלקטרואנצפלוגרפיה לתיעוד הפעילות האפילפטיפורמית

נוירוטרנסמיטורים כימיים שמשתחררים מתא עצב משפיעים על תאים שכנים, ומאפשרים לדחפים חשמליים לעבור בין נוירונים. עודף נוירוטרנסמיטורים מעוררים גורם להפרעות בפעילות החשמלית של המוח, מה שמוביל להתקפים חוזרים ונשנים - עירור נוירונים חוזר חריג ומוות עצבי הדרגתי, המוביל לאפילפסיה.

כדי לתעד פעילות אפילפטית ex vivo, התחל בלקיחת תוספת ממברנה המכילה פרוסות אורגנוטיפיות שמקורן במוח של גור חולדות, קליפת המוח הרינלית-היפוקמפוס, המתארות אירועים אפילפטיים מתפתחים. לכל פרוסה יש בליטה משוננת מוגדרת - אזור DG ואזור קורנו אמוניס - CA, המורכב מנוירונים פירמידליים רב-קוטביים ארוזים היטב.

תרבית הפרוסות למשך זמן ממושך, המדמה מצבי לחץ הנגרמים על ידי חסך הדרגתי בסרום המובילים למוות עצבי, הדומים למצבים אפילפטיים in vivo. הניחו פרוסה אורגנוטיפית אחת בתא ההקלטה של אלקטרופיזיולוגיה - EEG - שהוגדרו, כאשר ההיפוקמפוס נוגע בתחתית החדר.

תא ההקלטה מלא מראש במדיום המכיל L-גלוטמין - מבשר נוירוטרנסמיטר - היוזם עירור עצבי. הנח את האלקטרודה המקבלת המחוברת לנימים מזכוכית המכילה נוזל מוחי מלאכותי לאזור CA3 עשיר בנוירונים פירמידליים.

רשום את הפעילות החשמלית. צור אלקטרוגרף, המציג בקצרה אירועים איקטליים - אזורים עם שיאים פתאומיים - המתאימים לתחילת הפעילות האפילפטית.

מספר מוגבר של אירועים איקטליים, הנמשכים לתקופות ממושכות, מעיד על התקפים חוזרים.

הכן את מערך האלקטרופיזיולוגיה במעגל סגור. ודא שקצב הזרימה של התא מסוג הממשק מוגדר לשני מיליליטר לדקה, ופתח את שסתום ה-carbox. בדוק את מפלס המים במערכת, והנח פיסת נייר סינון בתא ההקלטה של הממשק כדי לנקז את כל המדיום העודף.

הנח פיסת נייר ניקוי לניקוי עדשות מתחת למסגרת כדי לספק מדיום לפרוסה, והפעל את בקר הטמפרטורה, המגברים והמיקרומניפולטורים.

השתמש במזרק כדי להעמיס את אלקטרודת הזכוכית בנוזל מוחי מלאכותי שהוכן טרי. הנח את אלקטרודת הזכוכית לתוך האלקטרודה המקבלת, והמתן עד שהטמפרטורה בתא הממשק תתייצב על 37 מעלות צלזיוס.

בעבודה בארון בטיחות ביולוגית, הניחו את התוספת בצלחת של 60 מילימטר עם טיפת מדיום. השתמשו בלהב חד כדי לחתוך פרוסה מהתוספת, והניחו את הפרוסה בתא הממשק כשההיפוקמפוס מימין למטה. לאחר מכן, הנח את האלקטרודה המקבלת בשכבת התא הפירמידלית CA3.

הפעל את פרוטוקול הרכישה הרציף והקלט את הפרוסה למשך 30 דקות.