בדיקת מוות עצבי להערכת מוות תאי במודל אפילפסיה Ex Vivo
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 4:25 דק׳ • July 8th, 2025
אפילפסיה - התקפים ספונטניים וחוזרים במוח - מובילה למוות של תאי עצב
.כדי לחקור מוות עצבי במודל אפילפסיה ex vivo, התחל בלקיחת פרוסה אורגנוטיפית של קליפת המוח-היפוקמפוס - שהוכנה ממוח גור חולדה - במדיום מתאים.
הפרוסה האורגנוטיפית מורכבת מקליפת החן וההיפוקמפוס. תחת חסך הדרגתי בסרום, אזורים אלה מתארים אירועים אפילפטיים מתפתחים, המובילים למוות עצבי הנגרם על ידי התקפים.
הוסף את הכמות הנדרשת של פרופידיום יודיד, PI - צבע פלואורסצנטי - לתרבית והדגירה. דרך קרום התא הפגוע, PI נכנס לתאי העצב המתים ונקשר ל-DNA; הנוירונים החיים, עם ממברנה שלמה, אינם מסוגלים לקלוט PI.
הנח את הפרוסה האורגנוטיפית על שקופית מיקרוסקופ לצביעה חיסונית. הוסף תמיסה חוסמת חדירות ודגירה.
מולקולות דטרגנטים בתמיסה מסיסות שומנים בממברנה, ויוצרות נקבוביות בקרום של תאים שלמים - מה שהופך אותם לחדירים לשלבי צביעה חיסונית. חלבונים בתמיסה חוסמת נקשרים באופן פסיבי לאתרים לא ספציפיים של התאים, ומפחיתים את צביעת הרקע.
הוסף תמיסת נוגדנים ראשונית החודרת לתוך הנוירונים ונקשרת לאנטיגן הגרעיני הספציפי לנוירונים - NeuN - המופץ במטריצה הגרעינית. הוסף נוגדנים משניים עם תווית פלואורסצנטית הנקשרים לנוגדנים הראשוניים.
הנח אמצעי הרכבה על השקופית כדי לייצב את הדגימה ולאטום עם כיסוי. תחת מיקרוסקופ קונפוקלי, תאים המראים צביעה כפולה - נוירונים מוכתמים
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים