בדיקת צבירה PolyQ לזיהוי השפעה נוירופרוטקטיבית של תרכובת בתולעים

בחלק מההפרעות הנוירודגנרטיביות, החלבון הקשור למחלה מורכב מפוליגלוטמין מורחב, polyQ, דרכי - מחרוזת של שאריות גלוטמין עוקבות - והוא תואם באופן חריג. הקונפורמציה הלקויה מערערת את ההומאוסטזיס של החלבון, גורמת להצטברות חלבון ולהיווצרות אגרגטים רעילים, מה שמוביל לתפקוד לקוי של העצבים ולמוות.

כדי לסנן את יכולת ההגנה של תרכובת בדיקה בהקלה על פרוטאוטוקסיות הקשורה לצבירת polyQ, השג השעיה של זחלי Caenorhabditis elegans טרנסגניים המבטאים חלבוני polyQ מתויגים פלואורסצנטיים בתאי שריר דופן הגוף.

קח צלחת מרובת בארות המכילה מדיה בתוספת מזון חיידקי. הוסף את תרכובת הבדיקה בסט בארות אחד. העבירו את הזחלים לצלחת מרובת הבארות. אטום את הצלחת כדי למנוע התייבשות מדיה וזיהום מיקרוביאלי. דגירה, מה שמאפשר לזחלים לגדול לבוגרים.

במהלך ההתפתחות, ככל שהנמטודה מזדקנת, חלבוני polyQ מצטברים בהדרגה בתוך תאי השריר ויוצרים אגרגטים.

אם תרכובת הבדיקה קיימת במדיה, היא נכנסת לתאי השריר, ובהתאם ליכולת ההגנה שלה, עלולה להפעיל אפקט צבירה אנטי-polyQ, לדכא ולעכב צבירת polyQ.

קצרו את הנמטודות והצנטריפוגות הבוגרות. השעו מחדש את הנמטודות הכדוריות. מעבירים לצלחת מרובת בארות. לשתק את הנמטודות באמצעות נתרן אזיד.

בעזרת מכשיר פלואורסצנטי ברזולוציה גבוהה, ספרו את הפונקטה הפלואורסצנטית, המייצגת אגרגטים של polyQ, לכל נמטודה.

מספר ממוצע נמו