אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 4:06 דק׳ • July 8th, 2025
הפרעות נוירודגנרטיביות תורשתיות מסוימות כוללות חלבונים עם שרשרת ארוכה של שאריות גלוטמין, הנקראים פוליגלוטמין, polyQ, דרך. חלבונים לא יציבים מבחינה מבנית ונוטים להתקפל בצורה לא נכונה מצטברים בסופו של דבר ליצירת אגרגטים רעילים, המשפיעים לרעה על תפקוד העצבים והישרדותם.
כדי להעריך את פוטנציאל ההגנה של תרכובת בדיקה על הישרדות עצבית מפני רעילות עצבית בתיווך polyQ, התחל בהשעיה של זחלי Caenorhabditis elegans טרנסגניים המבטאים חלבונים פלואורסצנטיים ופוליQ בנוירונים ASH - כימו-סנסוריים מזווגים.
מעבירים לבארות של צלחת מרובת בארות המכילה מדיה ומקור מזון חיידקי. הוסף את מתחם הבדיקה לקבוצה אחת של בארות. אטום את הצלחת, תוך מזעור התייבשות וזיהום מדיה. דגירה.
במהלך התפתחות התולעת, חלבוני polyQ יוצרים אגרגטים בנוירוני ה-ASH, מה שמוביל לרעילות עצבית הקשורה לצבירה ומשפיעים על הישרדות העצבים.
אם קיימת, תרכובת הבדיקה נכנסת לתאי העצב ובהתבסס על יכולת ההגנה העצבית שלה, עשויה לדכא צבירת חלבון polyQ, להפחית את הרעילות העצבית הקשורה ולשפר את ההישרדות העצבית.
אוספים את התולעים הבוגרות והצנטריפוגה. השעו מחדש את התולעים במאגר מתאים והעבירו על כרית אגרוז עם כימיקל מתאים לקיבוע.
באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי, דמיין את נוירוני ה-ASH כדי לזהות חלבונים פלואורסצנטיים, אינדיקטור להישרדות תאי
עצב.פלואורסצנטיות גבוהה י
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים