אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 6:19 דק׳ • July 8th, 2025
חשיפה לחומרים מזיקים גורמת לשברים חד-גדיליים ודו-גדיליים ב-DNA התאי, מה שמוביל לנזק ל-DNA.
כדי לזהות נזק ל-DNA, התחל עם תרחיף של תא בודד של תאים שטופלו בכימיקלים באגרוז נוזלי בעל נקודת התכה נמוכה. טען את התרחיף על מגלשת זכוכית, ואפשר לאגרוז להתמצק - מה שמאפשר קיבוע של תאים בתוך מטריצת הג'ל הנקבובית.
טפל בתאים עם מאגר ליזה. חומרי הניקוי במאגר מסיסים את הממברנות התאיות והגרעיניות, בעוד שהמלחים מסירים את ההיסטונים מה-DNA, ויוצרים גוף נוקלואיד המכיל DNA המחובר למטריצה הגרעינית.
דגרו את השקופיות במאגר אלקטרופורזה אלקליין. זה גורם ל-DNA להירגע וליצור שברים חד-גדיליים. הנח את השקופית במנגנון אלקטרופורזה, וחבר אותה לאספקת החשמל. זה מאפשר נדידה של DNA טעון שלילי לעבר האנודה החיובית.
ה-DNA הלא פגום נשאר מוגבל בתוך גוף הנוקלואיד. לעומת זאת, מקטעי הדנ"א הקטנים והפגומים מתחילים לנוע לעבר האנודה. התנועה הדיפרנציאלית הזו יוצרת מבנה דמוי שביט, שבו הדנ"א הלא פגוע יוצר את הראש, ואילו הדנ"א הפגוע יוצר את זנב השביט.
דגרו את המגלשה במאגר נטרול כדי לאפשר לשברי ה-DNA החד-גדיליים להתטבע מחדש. לאחר מכן, טפל בשקופית בצבע פלורסנט שמכתים את ה- DNA. דמיין את השקופית תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי.
עוצמת הזנב ואורכו נמצאים בקורלציה עם מידת הנזק ל-DNA התאי.
כדי להתחיל, הכינו נקודת התכה נמוכה של 0.6% ב- PBS, והניחו או
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים