בדיקת ספיגת חומצות אמינו עם תווית רדיופונית לכימות ספיגה תאית של חומצות אמינו

מובילי חומצות אמינו הם חלבונים הקשורים לממברנה המתווכים העברת חומצות אמינו על פני קרומי התאים, ומווסתים תהליכים תאיים חיוניים.

כדי לחקור ספיגת חומצות אמינו במבחנה, קח תרבית של תאי סטרומה שמקורם במח עצם עכבר. שאפו את מצע הגידול. הוסיפו חוצץ מחומם מראש בתוספת גלוטמין - חומצת אמינו - המסומנת במימן רדיואקטיבי. דגירה למשך הזמן הנדרש.

המאגר שחומם מראש מספק טמפרטורה פיזיולוגית ו-pH מתאים הנדרש לספיגה תאית של גלוטמין. מובילי גלוטמין מורכבים מתחומי הובלה - האחראים על טרנסלוקציה של מצע באמצעות הובלה משותפת בצימוד יוני נתרן - ותחומי פיגומים מעוגנים בממברנה.

תחום ההובלה נקשר לגלוטמין עם תווית רדיו יחד עם יוני נתרן מהמאגר. עם הקשירה, הוא משחרר את המולקולות לתוך הציטופלזמה. במקביל, תחום ההובלה מעביר יוני נתרן תוך תאיים וחומצות אמינו ניטרליות מחוץ לתא, וכתוצאה מכך הומאוסטזיס תאי.

שטפו את התאים עם מאגר קר כקרח, סיימו את התגובה והסירו כל גלוטמין חוץ-תאי עם תווית רדיו. הוסף תמיסת חומר ניקוי. חומר הניקוי מבצע ליזה של התאים, וגורם לשחרור גלוטמין תוך-תאי.

צנטריפוגה הליזאט. הוסיפו את הסופרנטנט המכיל גלוטמין לבקבוקון עם קוקטייל נצנוץ, והניחו את הבקבוקון בתוך דלפק נצנוץ.

מולקולות הגלוטמין המסומנות ברדיו פולטות חלקיקי בטא בעלי אנרגיה גבוהה. המנצנצים בקוקטייל סופגים את החלקיקים ופולטים פולסי אור המזוהים על