בדיקת פירובט להערכת רמות פירובט בשברים תאיים של תולעים

0 צפיות2:29 דק' • July 8th, 2025

ניתן להעריך את רמות הפירובט בתא - מתווך מרכזי במסלולים ביוכימיים לייצור אנרגיה - באמצעות מבחנים קולורימטריים מבוססי אנזימים.

כדי לקבוע את רמות הפירובט בתאים של Caenorhabditis elegans - נמטודה לא טפילית - קח חלק תאי שהוכן מתולעים בוגרות המכילות פירובאט. טפל בתמיסה, הסר חלבונים תאיים ואסוף את החלק התאי המובהר - דגימת הבדיקה - המכיל פירובאט. היעדר חלבונים תאיים מבטיח קביעה מדויקת של רמות הפירובאט.

התחל בהוספת מגיב עובד המכיל את האנזימים פירובט אוקסידאז וחזרת פרוקסידאז, וצבע כרומוגני. דגרו את התערובת בחושך למשך זמן מתאים.

במהלך הדגירה, פירובט אוקסידאז מגיב עם פירובט - המצע שלו - ויוצר מי חמצן כתוצר לוואי. היעדר אור מונע פירוק ספונטני של מי חמצן.

חזרת פרוקסידאז מזרזת את התגובה בין מי החמצן לצבע הכרומוגני, ומייצרת מוצר צבעוני. עוצמת תוצר התגובה הצבעונית עומדת ביחס ישר לריכוז הפירובט בדגימה.

עם סיום תקופת הדגירה, הנח את הדגימה בתוך קורא צלחות ומדוד את הספיגה. צור עקומה סטנדרטית באמצעות דילול סדרתי עם ריכוזי פירובט ידועים.

שרטט את ערך הספיגה הנמדד של דגימת הבדיקה על העקומה כדי לקבוע את ריכוז הפירובט בדגימת הבדיקה.

השתמש בערכת בדיקה קולורימטרית כדי למדוד את ריכוז הפירובט בדגימות הבדיקה, ובצע בדיקות דופלקס.

הוסף 10 מיקרוליטר מדגימות הבדיקה לבארות שונות של צלחת של 96 בארות, והוסף 90 מיקרוליטר של מגיב עובד לכל דגימה. דגירה מכוסה למשך 30 דקות בטמפרטורת החדר. לאחר מכן, הנח את הצלחת בקורא מיקרו-פלטות כדי למדוד את הספיגה של כל באר ב-570 ננומטר.

שרטט את העקומה הסטנדרטית של פירובט וחשב את ריכוזי הפירובט מהעקומה הסטנדרטית על ידי הכפלת כל ריכוז ב-2.25.

11:43

Hyperpolarized 13 ספקטרוסקופיה בתהודה מגנטית מטבולית C והדמיה

סרטונים קשורים

0 צפיות

04:30

מטריקה שיטת הצביעה של פעילות ציטראט סינתאז בדרוזופילה מלאנוסטר

סרטונים קשורים

0 צפיות

12:34

הערכת תכולת תאית גבישית של ביומסה צמחית בשיטת Updegraff

סרטונים קשורים

0 צפיות

12:10

פרופיל איזוטופים יציבים של שטף מטבולית מתווך בשלב פיתוח למבוגרים Caenorhabditis elegans

סרטונים קשורים

0 צפיות

03:44

בדיקת פעילות ציטראט סינתאז: בדיקה קולורימטרית למדידת פעילות סינתאז ציטראט מיטוכונדריאלי בהומוגנט רקמות דרוזופילה

סרטונים קשורים

0 צפיות

03:08

בדיקה קולורימטרית לכימות לקטט בדגימות בדיקה

סרטונים קשורים

0 צפיות

10:39

באמצעות מבודד המיטוכונדריה מכמויות מינימליות של שרירי שלד עכבר למדידות נשימה microplate תפוקה הגבוה

סרטונים קשורים

0 צפיות

10:12

בידוד של המיטוכונדריה מכמויות מינימליות של שרירי שלד עכבר למדידות תפוקה גבוהה microplate נשימה

סרטונים קשורים

0 צפיות

14:55

מדידה של צריכת חמצן מיטוכונדריאלי של סיבי Permeabilized דרוזופילה באמצעות כמויות מינימליות של רקמות

סרטונים קשורים

0 צפיות

09:35

ערכי צבע מוחלטים מבחני של תאיים לקטט בקנה מידה קטן ו פירובט ב נמטודות Caenorhabditis elegans

סרטונים קשורים

0 צפיות

עודכן לאחרונה: 29 אוגוסט 2026