ניתוח מבוסס עכבה תאית לניטור תהליכים תאיים בזמן אמת

למדידה רציפה של התנהגות התאים באמצעות ניתוח תאים בזמן אמת, RTCA, השג לוחית מיקרוטיטר RTCA המכילה מערכי מיקרואלקטרודות זהב למדידת עכבה המוטבעים בתחתית הבאר. הוסף בזהירות מדיום תרבית תאים לבארות.

בתוך המדיום המוליך חשמלית, הפעל פוטנציאל חשמלי חלש על פני המיקרואלקטרודות. הפוטנציאל גורם לזרם חשמלי לזרום בין המיקרואלקטרודות, מה שמקל על מדידת העכבה הבסיסית - ההתנגדות החשמלית הטבועה של המדיום.

פיפטה את הריכוזים הרצויים של תרחיף תאי יונקים לבארות המכילות מדיום. אפשר לתאים להתפזר באופן אחיד בבאר.

במהלך הדגירה, התאים נצמדים לקרקעית הבאר. התאים הדבקים במיקרו-אלקטרודות פועלים כמבודד, מגבילים את זרימת הזרם ומגדילים את העכבה.

בהדרגה, התאים מתרבים על המיקרואלקטרודות, מה שמוביל לעכבה אקספוננציאלית מוגברת.

לאחר היווצרות שכבת תאים מתלכדת, התאים נתקלים במחסור בחומרים מזינים ועוברים מוות. כתוצאה מכך, התאים מתנתקים מהמיקרואלקטרודות, ומפחיתים את העכבה.

מדידת העכבה הרציפה מאפשרת ניטור בזמן אמת של האירועים התאיים, כולל התפשטות תאים ומוות.

כדי לקבוע את כמות התאים המתאימה לזיהום בתאים, הכינו 24 שעות, כ-80% תרביות תאי MDCK קונפלואנט, כפי שהודגם, לפני שטיפת התאים ב-PBS, וקצירתם בדגירה של 45 דקות ב-3 מיליליטר של 0.25% טריפסין-EDTA לבקבוק ב-37 מעלות צלזיוס.

כאשר התאים התנתקו, עצרו את התגובה עם 7 מיליליטר של מדי