אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 3:35 דק׳ • July 8th, 2025
תאים מייצרים רמות נמוכות של רדיקלים חופשיים במהלך תהליכים מטבוליים.
במצבים פתולוגיים מתרחשת ייצור יתר של רדיקלים חופשיים, הגורם למתח חמצוני. רדיקלים חופשיים אלה תוקפים חומצות שומן רב בלתי רוויות בפוספוליפידים של קרום התא בתהליך הנקרא חמצון שומנים. זה יוצר תוצרי חמצון רעילים, כולל הידרופרוקסידים ליפידים ומאלונדיאלדהיד (MDA), הגורמים לנזק לממברנה ולמוות של תאים.
כדי לזהות מתח חמצוני בסרום אנושי במבחנה באמצעות בדיקת החומר המגיב לחומצה תיוברביטורית (TBARS), התחל בשפופרת המכילה סרום אנושי שטופל בתרכובת מעוררת חמצון. הסרום המטופל מורכב בעיקר מתוצרי חמצון שומנים - MDA והידרופרוקסידים ליפידים - יחד עם פוספוליפידים, ליפידים וחלבונים.
לאחר מכן, הוסיפו נתרן דודציל סולפט (SDS) וערבבו כדי להמיס את השומנים ולשחרר את ה-MDA. SDS מנטרל את כל החלבונים המזהמים. הוסיפו חומצה חומצית מתאימה, ואחריה חומצה תיוברביטורית חומצית (TBA). דגירה בטמפרטורה גבוהה.
בתנאים חומציים ובטמפרטורות גבוהות, מולקולות TBA מגיבות עם MDA, ויוצרות קומפלקס MDA-TBA יציב אדום-ורוד, הנקרא TBARS. דגירה על קרח כדי לעצור את התגובה ולייצב את הקומפלקסים הקיימים.
צנטריפוגה. אסוף והעביר את הסופרנטנט המכיל MDA-TBA לצלחת מרובת בארות. בעזרת קורא מיקרו-פלטות, מדוד את ספיגת המתחם.
ספיגה גבוהה יותר מצביעה על ריכוז גבוה של TBARS, מה שמעיד על רמו
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים