בדיקת הנבטת כורואיד לחקר התפשטות כלי דם עיניים Ex Vivo
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 3:48 דק׳ • July 8th, 2025
בעין היונקים, הכורואיד, הממוקם בין הסקלרה לרשתית, מכיל מקרופאגים פריוסקולריים וכוריוקפילריס - שכבה של נימי דם מרופדים על ידי פריציטים המספקים חמצן וחומרים מזינים לרשתית. כלי דם לא תקינים הנובטים מהכוריוקפילריס מתרחשים במספר מחלות עיניים בכלי הדם.
כדי לחקור כוריוקפילריס לא מווסת הנובט ex vivo, קח צמחי עין עכבר שנקטפו המכילים את הכורואיד המחובר לאפיתל הפיגמנט של הרשתית, או RPE.
הוסף טיפות של תמצית קרום בסיס, או BME - הידרוג'ל מועשר בחלבוני מטריצה חוץ-תאיים - לבארות של צלחת מרובת בארות. מניחים את הצמחים בטיפה, והימנעו מהשטחת רקמות. אפשר ל-BME להתמצק.
יש להוסיף מדיום בתוספת תאי אנדותל, או גורמי גדילה ספציפיים ל-EC. דגירה. ה-RPE מפריש גורם גדילה אנדותל של כלי הדם, אשר, לצד גורמי הגדילה הספציפיים ל-EC, ממריץ את התפשטות ה-EC הנימים.
ה-BME המוצק יוצר מטריצה חוץ-תאית המקדמת את ה-ECs המתרבים ליצירת צינורות דמויי נימים נובטים. פריציטים נודדים ונצמדים לנימים הנובטים הללו, מה שמקל על התבגרות הנימים ECs.
מקרופאגים מופעלים באזור ההנבטה מפרישים אנזימים לעיכול קרום הברוך - השכבה הכורואידית הפנימית ביותר - המאפשרת לנבטים לנדוד לתוך ה-RPE.
תחת מיקרוסקופ, דמיינו את הנימים הנובטים. בעזרת תוכנה מתאימה, מדוד את האזור המכוסה על ידי נבט הכורואיד.
אזור נביטה כורואידלי גדול יותר מצביע על נביטת כוריוקפילריס מ
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים