בדיקה מבוססת Luminescence להערכת רעילות עצבית של תרכובות בדיקה על נוירונים
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 4:00 דק׳ • July 8th, 2025
צמיחת נויריט - שבה נוירונים מפתחים הקרנות - חיונית לתפקוד עצבי והתחדשות.
כדי להעריך את ההשפעות הנוירוטוקסיות של תרכובות בדיקה מקדמות צמיחת נויריטים במבחנה, השג תא אב עצבי אנושי, hNPC, תרחיף באמצעי התמיינות.
זרעו את התאים לבארות צלחות מרובות בארות המצופות בפולי-L-ליזין ולמינין, מה שמקל על חיבור התאים לקרקעית הבאר ותומך בצמיחה תאית. מרכיבי אמצעי ההתמיינות מקדמים התמיינות hNPC לנוירונים.
טפל בקבוצה אחת של בארות עם תרכובת בדיקה מקדמת צמיחת נויריטים. זה מקיים אינטראקציה עם הנוירונים שמקורם ב-hNPC ועלול לגרום לצמיחת נויריטים, מבלי לשבש את תהליכי חילוף החומרים התאיים ואת הריכוז הבא של אדנוזין טריפוספט, ATP - מקור האנרגיה התאי העיקרי.
הוסף את המגיב החד-שלבי המכיל חומרי ניקוי, אנזים לוציפראז ומצע לוציפראז, מעכבי לוציפרין ו-ATPase יחד עם יוני מגנזיום, וערבב.
חומרי ניקוי משבשים את קרום התא, וכתוצאה מכך ליזיס תאים ושחרור ATP תוך תאי לתמיסה. מעכבי ATPase מעכבים את ה-ATPase האנדוגני המשתחרר, מה שעלול להפריע למדידת ATP. צנטריפוגה, משקעת פסולת תאים.
במהלך הדגירה, ה-ATP המשתחרר עם יוני מגנזיום גורם ללוציפרין להיקשר ללוציפראז, וכתוצאה מכך חמצון לוציפרין לאוקסילוציפרין נרגש מאוד, ופולט פוטון ביולומינסנט עם הרפיה למצב הקרקע שלו. בעזרת קורא מיקרו-פלטות, מדוד את הזוהר, המעיד על ריכוז ה-ATP.
ריכוז ATP גב
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים