$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
אינטראקציות חלבון-חלבון חיוניות לתפקודים תאיים חיוניים.
כדי לחקור את האינטראקציות בין חלבונים טרנסממברניים - חלבוני ממברנה המשתרעים על שכבת השומנים הדו-שכבתית של קרום התא, התחל בבארות של צלחת מרובת בארות המכילה תרבית תאי יונקים דביקה.
לאחר מכן, הוסף תמיסה המכילה חומר טרנספקציה מתאים וזוג פלסמידים לביטוי.
אחד הפלסמידים הביטוי מקודד חלבון טרנסממברני מעניין המאוחה למקטע הקטן והלא פונקציונלי של האנזים לוציפראז; הפלסמיד השני מקודד חלבון טרנסממברני שני מעניין המאוחה לשבר הגדול והלא פונקציונלי של האנזים לוציפראז.
דגרו את הצלחת. סוכן הטרנספקציה מקל על הספיגה התאית של פלסמידים הביטוי.
תאים שעברו טרנספטציה מוצלחת מבטאים את החלבונים הטרנסממברניים. האינטראקציה בין החלבונים הטרנסממברניים המבוטאים מביאה את השברים הקטנים והגדולים הפונים לציטופלזמה לקרבה, וגורמת להם להיקשר וליצור את אנזים הלוציפראז הפעיל.
החלף את המדיה בבארות במדיה נטולת סרום כדי למזער את זוהר הרקע. הוסף פורימזין - מצע לוציפראז חדיר לתאים - תמיסה. פורימזין נכנס לתאים, ובעקבותיו לוציפראז מחמצן את הפורימזין ויוצר זוהר בעוצמה גבוהה.
בעזרת קורא מיקרו-פלטות, מדוד את הזוהר, מה שמרמז על האינטראקציה החזקה בין החלבונים הטרנסממברניים.
קצרו את תרבית התאים HEK293T על ידי טריפסיניזציה, והשעו מחדש את התאים במצע גידול מלא ייעודי. צלחת את התאים על תחתית שקופה, צד לבן, צלחת 96 בארות. התאימו את המספר הכולל של הבארות כך שיתאימו לכל השילובים והבקרות שנבדקו, כולל שכפולים. לאחר מכן, תרבית התאים למשך הלילה בתנאים סטנדרטיים.
למחרת, העבירו את התאים עם השילובים הרצויים של פלסמידים לביטוי. לדלל את הפלסמידים במדיום נטול סרום ל-6.25 ננוגרם למיקרוליטר עבור כל מבנה, ולהוסיף את מגיב הטרנספקציה מבוסס השומנים ביחס מתאים של שומנים ל-DNA.
דגרו את הפלסמידים לפי הוראות היצרן. לאחר מכן, הוסף 8 מיקרוליטר מתערובת השומנים-DNA לבארות המיועדות לכך. מערבבים את תכולת הצלחת בסיבוב עדין, ומתרביים את התאים למשך 20 עד 24 שעות בתנאים סטנדרטיים.
למחרת, החלף את המדיום המותנה בכל באר ב-100 מיקרוליטר של מדיום נטול סרום, וודא שהתאים לא יתנתקו בעת החלפת המדיום.
רגע לפני מדידת הזוהר, ערבבו נפח אחד של פורימזין עם 19 נפחים של מאגר דילול. הוסף 25 מיקרוליטר מתמיסת העבודה של הפורימזין לכל באר, וערבב בעדינות את הצלחת ביד, או עם שייקר מסלולי.
הכנס את הצלחת לקורא מיקרו-פלטות זוהר, ויזן את הצלחת ב-37 מעלות צלזיוס למשך 10 עד 15 דקות. בחר את הבארות לניתוח, וקרא זוהר עם זמן אינטגרציה של 0.3 שניות. המשך לעקוב אחר הזוהר עד שעתיים בעת הצורך.