אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
טכניקות ביולוגיות
0 צפיות • 4:43 דק׳ • July 8th, 2025
אתרי דלקת מכילים תאי חיסון שונים, כולל מונוציטים, מקרופאגים ולויקוציטים.
כדי לזהות אוכלוסיית תאים הטרוגנית על ידי כתמים מערביים חד-תאיים, קח שבב ספיגה מיובש מראש, המורכב מג'ל פוליאקרילאמיד הניתן להפעלה פוטו-אקטיבית בדוגמת בלוקים. בכל בלוק יש מיקרו-בארות רבות. דפוס למספר בלוקים לוכד תאים מרובים במקביל.
הוסף תרחיף המכיל אוכלוסיית תאים הטרוגנית. מידות הבאר מאפשרות לתאים בודדים להתיישב. טבלו את השבב בתא אלקטרופורזה מלא במאגר מתאים. מולקולות הניקוי במאגר משבשות את קרום התא, ומשחררות תוכן תאי.
החל שדה חשמלי. החלבונים המשוחררים נודדים על פני הג'ל, ונפרדים לרצועות בגודל מובהק. שטפו את השבב עם מאגר כביסה כדי להסיר מולקולות שאינן קשורות במיוחד, והשאירו רק חלבונים תאיים, כולל חלבוני הסמן הרצויים.
חשוף את הג'ל לאור UV, מפעיל את פני השטח שלו ומשתק את החלבונים.
הוסף קוקטייל של נוגדנים ראשוניים הנקשרים במיוחד לחלבוני סמן ייחודיים לכל סוג תא, ויוצרים קומפלקסים של נוגדנים ראשוניים לחלבון. להוציא תערובת של נוגדנים משניים מתויגים פלואורסצנטיים, הקושרים את הנוגדנים הראשוניים שלהם, ומסמנים את חלבון הסמן הספציפי לתא.
הנח את השבב בסורק. מדוד את עוצמת הקרינה שהיא פרופורציונלית לרמת הביטוי של סמן החלבון המתאים הספציפי לתא בודד של תרחיף תא הדגימה.
לניתוח כתם מערבי חד-תאי, הוסף 1 מיליליטר של תרחיף חד-תאי מדו
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים